简介：

简介：2008年4月14日，全球领先的生命科学产品供应商通甩电气医疗集团生命科学部（GEHCLifeSciences）在中国科学院文献情报中心会议中心举办。挑战性蛋白质纯化讲座。北京站的活动，会议中心座无虚席．来自北京大学．清华大学．中国科学院．中国医学科学院等大学研究机构的专家学者出席了讲座，

简介：目的：为进一步研究CLP（coactosin-likeprotein）与5’-脂氧合酶、肌动蛋白的相互作用机制及功能，开展CLP克隆表达、分离纯化研究,以得到高纯度的CLP，并对其生物化学特性进行分析测定。方法：从人的胎肝cDNA文库中经PCR扩增得到CLP基因，克隆到原核表达载体pGEX-6p-1中并获得高效表达，经过GlutathioneSepharose4B亲和层析和Su-perdex75分子筛纯化，得到高纯度的CLP；在此基础上进行SDS-PAGE、动态光散射和分析型超速离心等实验，并进一步分析实验结果。结果：CLP在溶液中主要以单体形式呈现；CLP的摩擦率为1．909，证实该蛋白质具有线性化趋势存在的可能性，且线性化程度较高。结论：实验结果揭示了CLP作为线性化蛋白质的可能性，为进一步搭建CLP和丝状肌动蛋白的作用模型奠定了一定的数据基础。

简介：金耳（TremellaaurantialbaBandonietZang）是我国稀有的珍贵食用菌和药用菌，具有化痰、止咳、定喘、调气、平肝阳之功效。多糖作为金耳的主要生理活性成分之一，具有增强免疫、降血糖、降血脂、抗肿瘤、抗血栓和抗氧化等作用。但由于技术手段的落后，金耳多糖的化学研究比较滞后，其药理活性的研究也主要集中于粗多糖的研究，对均一多糖的化学结构分析和生物活性还很少涉及，这种状况对合理开发和利用金耳多糖产品造成很大影响。该研究对金耳子实体多糖进行了提取、分离纯化、结构鉴定、分子修饰和生物活性研究，为更好地开发金耳资源提供可靠的理论依据。利用水提醇沉、膜分离、离子交换层析（DEAE—SepharoseFastHow）和凝胶层析（SephacrylS500HR系列）等分离技术，采用体外刺激小鼠脾淋巴细胞的增殖试验作为活性筛选依据，获得3个较高生理活性的均一多糖（TAPAl、TAPBl和TAPEl）。其中TAPAl和TAPBl2种均一多糖的分子量分别为1．35X106D和7．6X105D，利用单糖组成分析、甲基化分析、红外光谱和NMR谱（一维和二维），对其一级结构进行了研究。TAPAl、TAPBl结构分别为

简介：比较HitrapG蛋白Sepharose亲和色谱系统对不同动物血清或腹水的纯化效果,为抗体纯化提供依据。结果显示,G蛋白对不同动物血清IgG吸附能力不同,体现在单位体积抗体回收量明显不同,这一特点与A蛋白亲和色谱系统相似。该方法简便快速,纯化抗体纯度高,免疫活性好,色谱柱可反复使用多次

简介：目的：通过对比透析去酚与超滤去酚后原液的各项质量指标的差异,找到最为合适的操作方法,从而达到优化工艺的目的.方法：Y群流脑粗糖冷酚提取后,将酚提上清液平均分成4份,分别进行4组去酚工艺试验,制备成Y群多糖原液,并进行原液各项指标的检定.对比4组原液指标,并参考由粗糖到精糖的收率情况综合考虑确定最佳的纯化工艺.结果：300kd的超滤膜包超滤去酚工艺效果最好.

简介：目的：分离、培养、纯化家猫的骨髓间充质干细胞，并对获得细胞的表面标志物进行鉴定，为进一步利用骨髓间充质干细胞的细胞移植实验奠定基础。方法：采用全骨髓贴壁法体外分离、培养、纯化家猫骨髓间充质干细胞，通过多次更换培养液获得较纯化的骨髓间充质干细胞，倒置相差显微镜下对细胞形态进行观察；根据第1、3、5、7、9代细胞的镜下增殖情况绘制出生长曲线；通过流式细胞仪检测细胞表面标志抗原CD34、CD44和CD90的表达率。结果：在倒置相差显微镜下观察，分离培养的骨髓间充质干细胞贴壁呈梭形或纺锤形；原代细胞生长丛集成片，5～7d达到融合，进行传代；培养到第三代以后，细胞出现相对均匀的梭形扁平外观，迅速增殖的细胞呈涡流样排列；第3、5代骨髓间充质干细胞增殖能力强于第7、9代；采用流式细胞仪分析结果显示细胞的CD34、CD44和CD90阳性率分别为17．5％、97．9％和91％，这与骨髓间充质干细胞表面抗原的表达一致。结论：分离培乔的细胞具有骨髓间充质干细胞特性，成分相对单一，第3、5代细胞纯度高，增殖能力强，适用于进一步的实验研究.

简介：在重组人胰岛素的过程中,可以利用蛋白化学物质及相应的纯化工艺对其进行相应的纯化,对重组人胰岛素的原核表达进行有机分析,可以为相应的纯化制备奠定一定的合理基础.在相应的下游纯化工艺中,主要使用的是一种复性溶液,其中含有一定比例的乙醇及谷胱甘肽.

简介：目的探讨兔肠道组织抗菌有效成分的组成及其性质.方法将新鲜兔小肠组织匀浆,经高温处理,乙酸浸提后,检测抗菌活性,再经SephadexG100和SephadexG75凝胶柱过滤层析,收集具有抗菌活性的蛋白组分,经SDS-PAGE电泳,考马斯亮蓝染色后,为一条蛋白带,其相对分子质量约为43×103.用琼脂糖弥散法和活菌计数实验检测纯化物对9株细菌的抑菌作用.结果分离得到一种纯的兔肠源抗菌蛋白,纯化的兔肠源抗菌蛋白对9株细菌的均有明显的抑菌作用,杀菌率介于78%与98%之间,显示了较强的抗菌活性.结论初步显示了兔肠源抗菌蛋白在细菌性疫病的防治方面的应用前景.

简介：本文是对一种利用树脂吸附来对氨基葡萄糖盐酸盐母液进行纯化方法的研究.方法：采用静态吸附试验和正交试验L9（34）,优化采用阳离子交换树脂纯化母液工艺条件,使得整体收率达到96.5%.结论：该优化条件得到较高产率和纯度的氨基葡萄糖盐酸盐.

简介：目的:利用昆虫细胞表达系统真核表达并纯化小电导钙激活钾离子通道蛋白1(KCNN1)。方法:以基因重组方法构建杆状病毒穿梭质粒reBacmid-KCNN1,将其转染至杆状病毒/Sf9细胞表达系统表达目的蛋白,并用Western印迹鉴定KCNN1的表达水平;用Ni-IDA-SepharoseCL-6B亲和层析柱纯化裂解细胞上清中的KCNN1,并用Western印迹鉴定纯化结果。结果:KCNN1在Sf9细胞中高效表达,通过亲和层析获得了纯化的KCNN1。结论:膜蛋白KCCN1在昆虫细胞Sf9中的表达与纯化,为深入研究其分子生物学功能提供了材料,也为全长膜蛋白的体外表达提供了一套可借鉴的实验方法。

简介：目的：构建40S核糖体蛋白S6的原核表达载体,表达并纯化S6蛋白,将其作为底物用于S6激酶（S6K）的体外活性测定。方法：采用RT-PCR方法从人胚肾细胞HEK293中获取S6cDNA,将扩增产物克隆至大肠杆菌表达载体中,进行酶切及测序鉴定;IPTG诱导GST-S6融合蛋白在大肠杆菌中表达,用谷胱甘肽亲和层析纯化GST-S6,免疫沉淀法检测该蛋白是否可作为底物用于S6K的体外激酶活性测定。结果：酶切及测序鉴定表明构建了S6原核表达载体,并表达及纯化出GST-S6融合蛋白,相对分子质量为55×103。该蛋白可用于S6K的体外激酶活性测定,特异性强。结论：S6蛋白的克隆、表达与纯化成功,可用于S6K的体外激酶活性测定,为研究S6K的功能奠定了基础。

简介：目的建立泰泽氏病原体（Ty）纯化方法，获得纯的菌体供抗原研究，为ELISA诊断抗原的制备提供依据；并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被磁珠，从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty；用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty的蛋白和抗原图谱；同时用免疫磁珠分离技术（IMS）直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内的Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化的Ty单克隆抗体M5以0．5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合的磁珠4h，可最大效率地富集Ty；分离反应进行1h，敏感性达到1矿菌体／mL；吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于磁珠上的细菌；抗原分析表明，IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分，纯化的TvRJ株具有3个免疫优势的抗原成分，相对分子质量（Mr）分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3；此外，IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生的Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty，并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查的候选方法。

简介：人白细胞介素4(hIL-4)是由Th2分泌的细胞因子,具有多种生物学功能,在人体免疫网络中具有重要的作用。它具有对T细胞、B细胞、胸腺细胞、造血干细胞等多种细胞的增殖效应,促进B细胞的分化,强化抗原表达,提高机体免疫功能;能与IL-2、GM-CSF、IL-10等多种细胞因子产生正协同效应,因而对免疫缺陷、肿瘤、造血障碍、感染性炎症等可产生积极的疗效。国外正进行Ⅱ期临床试验。

简介：随着我国科学技术的快速发展,生物技术应用水平取得了大幅度的提升,很多生物技术被广泛应用与蛋白质的生产过程中,例如,发酵工程、蛋白质工程以及基因工程等,但是在蛋白质的分离与纯化方面,技术水平发展仍较为缓慢,这在很大程度上制约着蛋白质的工业化建设,致使其所具备的经济效益以及社会效益无法得以全面发展.

简介：收集产重组组织型纤溶酶原激活剂（ｒｔ－ＰＡ）的ＣＨＯ工程细胞灌流培养上清，经过Ｓｔｒｅａｍｌｉｎｅ扩张柱床和赖氨酸－Ｓｅｐｈａｒｏｓｅ４Ｂ柱亲和吸附色谱纯化后，最后产品的比性达到６０００００ＩＵ／ｍｇ蛋白，ｒｔ－ＰＡ总活性回收率在９８％左右，经还原ＳＤＳ－ＰＡＧＥ分析主要为高相对分了质量ｒｔ－ＰＡ蛋白，ＨＰＬＣ分析达到色谱纯，Ｎ端１５个氨基酸序列和ｐＩ与文献报道的一致。蛋白质印迹实验证实具有ｔ－Ｐ

简介：利用PCR技术扩增HCVns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性.HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.

简介：目的：采用一种简单易行的纯化方法获得高纯度α-半乳糖苷酶单克隆抗体。方法：使用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶捕获和纯化小鼠腹水中的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结果：获得了高纯度、高效价的α-半乳糖苷酶单克隆抗体。结论：应用重组A蛋白偶联的琼脂糖凝胶纯化α-半乳糖苷酶单克隆抗体是一种简单、有效的方法。

简介：在大肠杆菌中,利用新构建的含T7g-10LRBS以及λ-PR启动子的新型原核表达载体,通过表达gag-pol基因片段,获得了具有天然序列的人类免疫缺陷病毒1型(HIV-1)核心蛋白p24的高效表达。克隆的gag-pol基因片段在其阅读框架移位区域插入了4bp碱基,其表达的病毒蛋白酶在阅读框架上与gag一致,从而实现了对gag-pol融合蛋白的有效加工,产生成熟的核心蛋白p24及其它产物。重组p24以可溶形式存在,可以被抗p24的单克隆抗体特异识别。测定的N端8个氨基酸序列与从病毒纯化的p24完全一致。在使用硫酸铵沉淀后,采用两步离子柱层析,可将重组蛋白纯化到95％以上的纯度。结果表明,纯化的p24可以作为特异性很强的试剂而用于HIV感染的诊断及病情的预后,并可用于p24的生化及结构分析。

简介：目的：SARA/SBD是纤维化形成过程中的负性调节因子。原核表达、纯化含反式激活蛋白（TAT）蛋白转导域（PTD）的TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,并鉴定其生物学活性。方法：将TATPTD-SARA/SBD基因克隆入带His标签的原核表达载体pET-44a（＋）中,转化大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,表达产物经Ni2＋-NTA亲和层析柱纯化后,SDS-PAGE和Western印迹鉴定目的蛋白;用人腹膜间皮细胞系（HPMC）,通过免疫细胞化学方法检测其穿膜能力,及与TGF-β1信号通路中Smad2因子的共定位情况。结果：用基因工程方法表达和纯化了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,目的蛋白约占菌体总蛋白的20%左右,且以可溶形式表达,经Ni2＋-NTA纯化后,所获蛋白纯度高于95%（HPLC归一法）;功能学实验结果显示该蛋白能穿过胞膜,主要定位于胞核,且与Smad2因子具有核内共定位。结论：表达了TATPTD-SARA/SBD融合蛋白,该蛋白具有生物学活性。