简介:摘要目的优化和评估粪便和组织样本高通量测序前处理方法,提高高通量测序在宏病毒组研究中的灵敏度。方法针对粪便样本,选取经粪便排毒的5种病毒阳性样本混合模拟样本,对不同材质的滤器、核酸酶不同处理时间、不同的提取核酸方法进行评价。针对组织样本,选取动物组织中检出的2种病毒阳性样本,对过滤、核酸酶处理和不同的核酸提取方法进行评价。采用TaqMan real-time PCR定量方法评价每步处理对每一种模式病毒核酸载量的影响,采用SYBR Green real-time PCR方法对细菌16S rRNA基因和宿主12S rRNA基因进行定量以评价细菌和宿主的去除效果。结果对于粪便样本,使用0.22 μm的PES滤器过滤效果较好,使用PVDF材质滤器导致样本量减少;核酸酶消化2 h比消化1 h去除细菌的效果更好,且病毒损失较少;使用RPMK试剂盒可以有效减少细菌,但对部分病毒提取效果较差,而MVSK试剂盒提取病毒核酸效果较好。对于组织样本,使用0.22 μm的PES滤器过滤病毒损失较少;核酸酶消化1 h可以有效去除宿主gDNA,且病毒损失较少;使用VNAEK II试剂盒提取病毒核酸效果最好,Trizol LS+RPMK方法去除宿主gDNA效果较好,但病毒损失较大。粪便和组织样本的前处理方法整个流程的病毒损失分别为(1.7-3.0)Ct和(1.6-2.5)Ct。结论粪便样本最佳方法为PES滤器过滤、核酸酶消化2 h、MVSK试剂盒提取核酸;组织样本最佳方法为PES滤器过滤、核酸酶消化1 h、VNAEK II试剂盒提取核酸。
简介:摘要:目的 了解样本不同前处理方式对新冠核酸检测的影响,为痰液和粪便新冠核酸检测提供前处理依据,保证实验检测的灵敏度和准确性。方法 对新型冠状病毒核酸检测阳性的痰液和粪便标本采用不同的前处理方式后进行核酸提取,实时荧光PCR进行检测,用配对设计(自身配对设计)资料的t检验方法分析样本CT值差异有无统计学意义。结果 以病毒保存液(不灭活)组作为参照方法,56℃60min灭活,蛋白酶K溶液和Trizol试剂处理组痰液和粪便标本CT值差异无统计学意义。痰液标本4%NaOH处理组与参照方法组相比CT值差异有统计学意义(靶标ORF1AB、N和内标t值分别为7.29、9.285和7.654,自由度v=4,P值均<0.05),4%NaOH处理组CT值较高。结论 应在检测前对痰液和粪便标本56℃60min灭活处理,不能采用4%NaOH处理痰液,蛋白酶K溶液和Trizol试剂处理样本对核酸检测没有显著影响,可根据本实验室情况进行选择。
简介:摘要粪便的形状和组成除与食物的质与量有关外,还与食管、胃、小肠、大肠、肛门以及通向消化道的肝、胆、胰腺等器官的功能状态、器质性病变有关。粪便常规检查包括粪便一般性状检查、显微镜检查、粪便化学检查。目的讨论粪便化学检查。方法对采集的样本进行化学检查。结论粪便的检查对某些消化道疾病及寄生虫感染患者,在临床诊断、治疗、防治上有着极其重要的意义,并可给临床提供可靠的诊断依据。
简介:摘要:目的 为了更加清楚的了解自动粪便检验仪检测粪便隐血的应用价值情况和准确率情况等。 方法 将我院 2019 年 3 月 -2020 年 3 月住院患者送检粪便标本 98 例纳入到本次研究中,以上所选标本分别采用传统手工加样法和自动粪便检验仪进行检查,对两种检测方式的检测结果进行比较。 结果 98 份粪便标注中,经过手工加样方法检测之后,有 29 份被检测为阳性,阳性率是 29.59% ;经过自动粪便仪检测之后,有 57 份被检测为阳性,阳性率是 58.16% ,相比于手工加样方法检测,自动粪便检测仪的敏感程度更高,差异显著,统计学意义成立, P<0.05 ,经过一致性分析之后, Kappa 值是 0.698 ,表示自动粪便检测仪和手工加样法均具有良好的一致性。 结论 虽然手工加样法和自动粪便分析仪均具有良好的一致性,但是自动粪便分析仪的敏感程度显著高于手工加样法,可以避免手工加样检测方法中的不足和缺陷,在临床检验中有着非常良好的应用价值和推广价值。