简介：目的观察人脐带间充质干细胞（HUC—MSCs）经低温冻存复苏后的生物学特性，验证其是否仍具有间充质干细胞的基本特征。方法用胶原酶和胰蛋白酶消化脐带，分离诱导获得HUC-MSCs，传代培养，取第3代细胞加入冷冻保护剂（10％DMSO＋40％FBS＋50％DMEM／F12）后将其冻存于一80oc冰箱过夜，再转入液氮气相中保存1个月后复苏。采用倒置显微镜观察复苏后贴壁生长细胞的形态；台盼蓝拒染法比较冻存前后细胞活力；MTT法测定HUC—MSCs的增殖活性，比较冻存前后HUC—MSCs增殖活性的差异；流式细胞仪检测HUC—MSCs经冻存复苏后表面抗原的表达情况；复苏后HUC—MSCs进行成骨诱导分化培养，检验其是否仍具有多向分化潜能。结果HUC—MSCs经低温保存复苏后，细胞仍保持贴壁生长等外形特征，复苏后HUC—MSCs存活率为91．17oA；增殖活性与未冻存细胞比较，差异无统计学意义；细胞表面高表达CDl05、CD73、CD71、CD90、CD29、CD44、CDl3抗原，低表达或不表达CD34、CDl33、CD45、CDl4，HLA—DR、CD86、CD83、CD80、CDla~复苏后HUC—MSCs具有向成骨细胞诱导分化能力，细胞经茜素红、ALP和Von—Kossa’s染色呈阳性反应。结论经冻存复苏后的HUC—MSCs保持了间充质干细胞的基本形态，其表型满足间充质干细胞的基本要求，仍具有向成骨细胞分化的潜能。

简介：摘要目的探讨人骨髓间充质干细胞体外培养的可靠方法。方法采用人手术切下的骨头标本，运用全骨髓贴壁法分离培养hBMSCs；观察并绘制生长曲线；取生长状态良好的第四代细胞，通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物等鉴定hBMSCs；诱导hBMSCs分化为成脂肪细胞，鉴定本实验所分离的hBMSCs是否具有多向分化能力。结果第四代细胞CD29和CD44阳性表达率分别为100％和99.8％，CD31和CD45阳性表达率分别为0.8％和0.4％。流式细胞仪检测证明本研究分离培养hBMSCs的方法可以获得高纯度的间充质干细胞。hBMSCs体外诱导向脂肪细胞分化16d后，镜下可见胞浆内充满圆形脂滴，油红O染色阳性，诱导成脂肪细胞分化率为85.1±3.2％，证实本实验分离的hBMSCs具有多向分化能力。结论采用手术切下的骨性关节炎标本，运用全骨髓贴壁法可获得稳定、均质性良好的hBMSCs，并具有多向分化能力。本方法能为临床上分离、培养人骨髓间充质干细胞提供了另一种可靠的路线。

简介：摘要间充质干细胞是一种非造血干细胞，但拥有向间充质和非间充质组织细胞分化的能力，而且这些细胞通过多种途径，如分泌细胞因子、向其他细胞系分化及细胞与细胞的接触机制等改变临床疾病的病理过程，目前间充质干细胞作为细胞工程种子细胞被越来越多的体内外实验证实其临床使用价值，并进一步推广应用于临床治疗各种免疫系统疾病和其他退行性疾病。因此，对于其本身细胞向各种成熟细胞分化的内在机制的充分了解是非常重要的，借此希望通过对目前的间充质细胞在体内外和临床试验的诱导分化方向的实验做一概述，可以为间充质细胞作为治疗方式提供临床支持依据。

简介：间充质干细胞（mesenchymalstemcells，MSCs）是来源于胚胎发育早期中胚层的具有自我更新和多向分化潜能的干细胞，存在于机体的骨髓、脾脏、脐带、羊水等不同组织中。近年来，人们对MSCs体外免疫特性方面的相关研究表明，MSCs具有较小的免疫原性，在免疫反应中可逃避免疫识别，主要通过细胞因子的分泌、直接接触和抑制T细胞对抗原的免疫反应等途径发挥作用。本文就MSCs的体外免疫学特性和应用前景作一综述。

简介：摘要目的分离、培养符合实验要求的小鼠骨髓间充质干细胞并进行鉴定，为进一步的研究打基础。方法采用贴壁培养法培养小鼠骨髓间充质干细胞，观察细胞的形态及生长特性，并应用流式细胞仪对细胞表面抗原CD34、CD45、CD29、CD44进行表型鉴定。结果原代分离的间充质干细胞在接种后培养24小时，细胞开始贴壁，胞体呈圆形或多边形，培养第3-5天，细胞开始较紧密贴附壁上并开始有细胞呈梭形，培养第7天开始观察到细胞分裂，随着细胞数的增加，细胞的生长速度变快，逐渐成漩涡状排列，培养第12天贴壁细胞长满瓶底的80%，并融合成片。传代后细胞生长迅速，培养7天左右即可长满瓶底的80%。传至10代仍具有良好的增殖活性。流式细胞仪检测第4代及第8代MSCs细胞均不表达CD34、CD45，但表达CD29、CD44，纯度分别为73.8%、91.65%。结论采用贴壁培养法可获得生长状态良好、增殖能力强的间充质干细胞，随传代数增加，其纯度增加，且该方法简单、实用。

简介：本研究培养小鼠密质骨间充质干细胞（MSC）并分析其免疫功能和分化潜能。分离小鼠双侧股骨和胫骨,反复冲洗,取出骨髓细胞,用胶原酶消化骨碎片,分离有核细胞并接种于6孔板。对第3代MSC进行免疫表型测定、免疫抑制功能分析及进行成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞诱导分化实验。结果表明,培养3周内可自小鼠密质骨分离高纯度的MSC,后者具有向成脂细胞、成骨细胞和成软骨细胞分化的潜能,具有抑制混合淋巴细胞反应的功能。BALB/cT细胞经C57BL/6T细胞刺激后对照组液体闪烁计数仪检测每分钟计数（CPM）值为（2.56±0.31）×104,而与细胞比例为100∶1和10∶1的C57BL/6第3代密质骨MSC共孵育组的CPM值分别为（0.47±0.12）×104和（0.28±0.09）×104,MSC处理组CPM值与对照组CPM值相比差别有统计学意义（P〈0.001）,MSC抑制功能呈剂量依赖性。结论：小鼠密质骨富含MSC,原代培养MSC造血细胞污染程度低,具有抑制混合淋巴细胞反应功能,具有更广泛的实验研究应用价值。

简介：间充质干细胞（MSC）已经用于多种损伤组织的修复,但无论全身或局部应用,培养的MSC进入体内后短期内大量死亡。为探讨死亡细胞发挥组织修复作用的机制,本研究以大鼠MSC为对象,利用低氧及乏营养为诱导条件,对凋亡MSC释放的亚细胞结构进行了分析。结果表明,低氧（1%O2）及无血清培养均可诱导MSC凋亡,尤以二者联合为著,72h后细胞凋亡比例达（17.44±2.15）%。与此同时,培养上清经低温超速离心后,流式细胞仪分析证实,细胞可释放大量的膜微粒（microparticles,MP）,其表面同时表达CD29、CD44A和凋亡相关的磷脂酰丝氨酸。结论：MSC经诱导后释放MP,其量相当于原细胞数目的15.2倍。MP是组织损伤后细胞间信息传递的重要介质。本研究为探讨MSC治疗机制提供了新的思路。

简介：本研究探讨人脐带间充质干细胞（UC-MSC）在体外培养的衰老过程中细胞生物学特征及衰老相关基因的变化特点。体外分离培养UC-MSC,取第3代（对照组）和第15代（衰老组）细胞进行形态学观察、增殖检测、流式表型测定和人类全基因组表达谱芯片分析,并选取重要基因进行定量逆转录多聚酶链反应验证。结果显示,与对照组相比,衰老组细胞形态变大,增殖速度减慢,但CD44和CD105等细胞表型阳性率无变化;衰老细胞组的核糖体小亚基组成相关基因显著上调,上调的信号通路主要涉及类固醇合成、半乳糖代谢、自身免疫病和退行性疾病;下调明显的是细胞骨架,DNA、mRNA结构的结合以及蛋白质功能等相关基因,与细胞黏附功能和细胞增殖周期等相关。结论：第15代的UC-MSC出现细胞代谢与增殖功能下降,从而导致细胞衰老。

简介：

简介：间充质干细胞分化为成骨细胞的过程中受到基因表达的精确调控。近年来诸多研究表明microRNA（miRNA）在问充质干细胞的成骨分化过程中发挥着重要的调节作用。miRNA是一类小分子非编码RNA，主要通过与靶基因mRNA的碱基配对导致其降解或翻译阻遏，对基因进行转录后的调控。本文就不同miRNA分子对间充质干细胞成骨分化过程的双向调节功能及环境因素对其影响等方面做一综述。

简介：背景：骨髓间充质干细胞在骨髓中的含量极低,体外的长期培养过程中易丧失干细胞潜能以及体内移植后安全性等问题的存在,限制了骨髓间充质干细胞在临床上的广泛应用。目的：探索体外分离纯化、冻存大鼠骨髓间充质干细胞的最适方法,并观察以此方法培养的骨髓间充质干细胞移植体内后是否具有成瘤性。方法：分别采用差速贴壁结合24h首次换液、24h首次换液、48h首次换液的方法纯化培养骨髓间充质干细胞,筛选最适纯化方法进行后续实验。配制含体积分数为10%,20%,30%,40%,50%胎牛血清的细胞冻存液冻存细胞,复苏后计算细胞存活率,测定复苏后细胞的生长曲线及成脂诱导能力。将第3,15代骨髓间充质干细胞进行裸鼠肌肉、肝脏局部注射体内移植,45d后取注射部位行病理组织标本检查。结果与结论：差速贴壁结合24h首次换液法所获得骨髓间充质干细胞纯度最高,而细胞增殖能力与其他两组无明显差别,因此选用该方法纯化骨髓间充质干细胞,然后进行传代培养;含体积分数为30%血清冻存液既可保证细胞活性与增殖能力,又可保证干细胞特性及多向分化潜能。骨髓间充质干细胞传至15代仍保持间充质干细胞特性,骨髓间充质干细胞移植入裸鼠肝脏45d后仍可在肝脏局部存活,生长状态与体外培养相似,无异型性及向周围浸润生长,提示体外长时间培养15代以内的骨髓间充质干细胞可在裸鼠体内存活且无成瘤性。

简介：摘要目的探讨脂肪间充质干细胞在体表软组织缺损修复中的作用，对相关的研究进展进行总结，重点将脂肪间充质干细胞在组织缺损修复中的的优势进行文献综述。方法以adiposetissue-derivedstemcell，tissueengineering，stemcells为检索词，检索Pubmed数据库(1991-01/2010-06)。以“脂肪间充质干细胞”、“组织工程”为检索词，检索CNKI期刊全文数据库(1991-01/2010-06)。文献检索语种限制为英文和中文。纳入软组织修复的基础及临床研究，排除重复性研究及目的与本文不相关的研究。结论脂肪间充质干细胞在一定条件作用下可以修复皮下软组织缺损，可以作为组织工程的种子细胞。

简介：人骨髓来源的间充质干细胞（BMSCs）具有很重要的临床治疗价值，小鼠BMSCs为研究观察这些前体细胞群的生物学性能提供了重要的基础模型。本研究从转基因小鼠骨髓中早期分离培养BMSCs，并进行鉴定。把Twist2-ere小鼠与含有Cre报告子的小鼠（如Z／EG和Ai9）杂交，可分别表达EGFP和番茄红荧光蛋白，其中的Cre可切除终止子序列。

简介：目的探讨黄芪多糖注射液对鼠骨髓间充质干细胞（MSC）增殖的影响。方法体外培养MSC,用活细胞计数法（CCK-8）检测黄芪多糖注射液促进大鼠MSC的增殖作用;在给大鼠体内肌注黄芪多糖注射液的第3、4天腹腔注射5-溴尿嘧啶核苷（Brdu）,免疫组化检测MSC细胞的Brdu标记阳性率。结果三种高浓度的药液对MSC的增殖与生理盐水对照组比较有显著性差异;停药后3～5d,黄芪多糖组Brdu标记阳性细胞率与生理盐水组比较有显著差异。结论黄芪多糖注射液具有促进MSC增殖的作用。

简介：背景：研究表明，细胞分化程度低的骨髓间充质干细胞移植在缺血环境的转归对疗效有很大影响。目的：探讨氧体积分数改变对大鼠骨髓间充质干细胞增殖和归巢能力的影响。方法：分离SD大鼠骨髓间充质干细胞，分别在低氧（体积分数1%O2）和常氧（体积分数20%O2）条件下培养0~7d。细胞Transwell小室迁移实验分组为4组：体积分数1%O2培养1%O2迁移组、体积分数20%O2培养1%O2迁移组、体积分数1%O2培养20%O2迁移组和体积分数20%O2培养20%O2迁移组，比较不同氧体积分数变化条件下迁移细胞数。观察不同氧体积分数变化对间充质干细胞表达整合素β1和细胞间黏附分子1的影响，实验分为4组：恒定体积分数20%O2培养；恒定体积分数1%O2培养；体积分数20%O2培养后1%O2继续培养6h；体积分数1%O2培养后20%O2继续培养6h。结果与结论：骨髓间充质干细胞在体积分数1%O2环境下增殖能力及迁移能力均增强，在体积分数20%O2环境下增殖能力及迁移能力减弱（P〈0.05）；整合素β1表达水平在体积分数1%O2环境下增强（P〈0.05）。提示大鼠骨髓间充质干细胞移植在低氧（体积分数1%O2）下增殖和迁移能力增强。

简介：背景：制备脐血血清体外扩增、培养间充质干细胞成为目前的研究热点,但尚无不同体积分数脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响的报道。目的：观察比较不同体积分数的脐血血清对骨髓间充质干细胞的增殖能力的影响。方法：无菌条件下取20例人骨髓标本,采用密度梯度离心法提取单个核细胞,分别用体积分数为5%,7.5%,10%,15%,20%的脐血血清＋DMEM/F12培养基,行骨髓间充质细胞培养,取第3代细胞,用MTT法观察不同体积分数的脐血血清对间充质干细胞的增殖能力的影响。结果与结论：在体积分数5%,7.5%,10%的脐血血清＋DMEM/F12培养基组,细胞增殖能力较佳,明显优于体积分数15%,20%的脐血血清＋DMEM/F12培养基组,差异有显著性意义（P〈0.05）。说明在较低体积分数脐血血清培养体系中,骨髓间充质干细胞增殖状态活跃。

简介：目的探讨组蛋白去乙酰化酶抑制剂丁酸钠（sodiumbutyrate）和DNA甲基化抑制剂5-aza对骨髓间充质干细胞（BMSCs）向心肌细胞分化的影响。方法常规培养大鼠BMSCs，细胞分为4组：依次加入丁酸钠0mM，0.5mM，1.0raM，2.0mM。MTT和流式细胞仪检测不同浓度丁酸钠对细胞增殖和凋亡的影响。4周后利用westernblot和免疫荧光检测4组细胞的心肌细胞特异性蛋白的表达。从上述4组中选出诱导能力最强的丁酸钠组与5-aza组成4个实验组：阴性对照组，5-aza组，丁酸钠组，5-aza.L丁酸钠组。作用4周后检测心肌细胞特异性蛋白的表达。结果丁酸钠抑制细胞增殖，具有浓度依赖性，而对细胞凋亡没有明显影响。检测发现丁酸钠和5-a．za均能有效诱导BMSCs分化为心肌细胞，丁酸钠诱导分化最适浓度为1.0mM。同时1．0mM丁酸钠诱导分化效率高于5-aza。除此，5-aza和丁酸钠共同作用于BMSCs，其诱导分化能力明显高于其它组。结论丁酸钠能够有效诱导BMSCs向心肌细胞分化，丁酸钠浓度为1．0mM时诱导能力最强，同时诱导分化率高于5-aza。5-aza和丁酸钠一起作用诱导BMSCs向心肌细胞分化的能力明显高于其它组，间接证明DNA去甲基化和组蛋白乙酰化具有协同作用。丁酸钠在有效作用浓度范围内，虽然抑制BMSCs增殖，但是不影响细胞凋亡，表明丁酸钠具有低毒的特性，为以后丁酸钠应用于临床打下实验基础。

简介：背景：绝经后骨质疏松的发病与雌激素水平的下降关系密切。目的：观察不同浓度雌激素对小鼠骨髓间充质干细胞成骨分化能力的影响，及其与微小RNA-26a的关系。方法：取小鼠股骨与胫骨骨髓，全骨髓贴壁法获得并纯化骨髓间充质干细胞，分别以0，10-10，10-9，10-8，10-7，10-6mol/L的雌二醇对其成骨诱导过程进行干预。结果与结论：雌二醇对骨髓间充质干细胞的增殖能力影响不明显，但可明显提高其成骨能力；同时雌二醇可促进骨髓间充质干细胞成骨基因RUNX2，OCNmRNA及RUNX2，SP7蛋白的表达，以10-9mol/L雌二醇的作用最明显，但10-9mol/L雌二醇促进微小RNA-26amRNA表达的能力最弱。说明雌二醇可剂量依赖性促进骨髓间充质干细胞的成骨分化，微小RNA-26a可能在此过程中发挥作用。

简介：背景：骨髓间充质干细胞具有广泛的应用前途,其三系分化的能力和免疫诱导特性使其具有再生医学的应用前景。目的：从小鼠骨髓中研究分离制备Flk-1＋间充质干细胞的新方法,检测了这类细胞的生物特性。方法：以小鼠骨髓为研究对象,分离单个核细胞,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测它们的细胞周期、表型和多系分化的能力。结果与结论：小鼠来源的骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,小鼠骨髓来源Flk-1＋间充质干细胞在光镜下均呈成纤维样或多角型贴壁生长,在体外相应的诱导液环境中均可以向三系分化。提示小鼠骨髓来源Flk-1＋间充质干细胞具有多向分化潜能。

简介：目的在体外观察不同浓度的甲基强的松龙对大鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)增殖、凋亡和细胞周期的影响。方法细胞直接计数绘制出MSCs生长曲线,流式细胞术检测其凋亡和细胞周期。结果在第3天,甲基强的松龙在30、40mg/100ml浓度下,MSCs的增殖受到显著性抑制[(12.21±0.47)×10^4与(12.10±0.06)×10^4,空白对照为(15.88±0.51)×10^4,P<0.05],而在第7天,增殖恢复至正常状态。甲基强的松龙在40mg/100ml浓度下,可减缓MSCs的凋亡[(1.88±0.40)%],空白对照为(2.40±0.36)%(P<0.05)。在低浓度下,甲基强的松龙对细胞周期无明显影响,在40mg/100ml浓度下,在第1天,进入G2~M期细胞数明显增加,而第3~7天明显减少,S期细胞增多。结论在较高浓度下,甲基强的松龙对MSCs的增殖、凋亡和细胞周期有一定程度的影响。