简介：本研究建立了农杆菌介导的玉米合子转化方法。用农杆菌介导合子转化方法，以含有bar基因的标准双元载体PTF102和含有bar基因和双价抗虫基因Cry1A（a）或Cry1A（c）、PTA（半夏凝集素）的载体p3300-Bt-pta转化玉米自交系吉8902、丹340、吉4112、吉853、铁7922及PA91，直接从受体植株得到转化种子，用除草剂PPT筛选和PCR鉴定，获得转基因植株及后代。实验分析了2002年、2003年和2004年的3批转化操作的结实率、转化率及转基因的遗传情况：经农杆菌侵染的雌穗平均结实率为39％，合子转化频率达1％以上，转基因可以遗传下去。农杆菌介导玉米合子转化方法可以重复获得成功，表明我们成功建立起一个新的不依赖组织培养的玉米转基因技术体系。

简介：环境胁迫严重影响作物的生长和发育，热激转录因子（heatshockfactor8，HSF）是一类在热应激反应中起重要作用的蛋白质，主要功能是在热休克基因的表达过程中与相应热激元件结合，启动基因的转录过程，最终促进热休克蛋白（HSP）基因的表达。本文将热激转录因子8（hsf8）基因构建在植物表达载体pCAMBIA3300中，以大豆子叶节作为受体，通过农杆菌介导法将hsf8基因导入品质性状优良的两个高产大豆新品系哈交5337和哈交5489中，最后获得转基因植株。在开展大豆遗传转化过程中，探讨了农杆菌介导大豆子叶节转化体系的影响因素，优化了转化条件。在共培养后，采用延迟筛选的方法来提高选择效率。并确定草胺磷筛选浓度为3．5mg／L。获得转化质粒pCAMBIA3300-HSF8的转基因植株，其中T1代PCR阳性植株17株。采用Real—timePCR的方法对T1代抗性植株进行hC8基因的转录水平的相对定量分析，确定9株较非转基因植株哈交5337表达量明显提高。有1株明显低于哈交5489的凤届基因表达量。

简介：为建立简单高效的黄瓜转基因技术体系,本研究以携带有抗除草剂Bar基因的农杆菌工程菌浸泡处理开花期黄瓜嫩梢,进行活体植株转基因方法研究。研究结果表明最佳转化体系为：表面活性剂silwet-77适宜浓度0.01%-0.05%;菌液浸泡最佳位置为顶部以下10cm嫩梢,最适子房发育时期为开花前5-12d子房;农杆菌菌株EHA105浸染效果优于LBA4404;3次重复浸泡处理有利于提高转化频率。黄瓜苗期除草剂抗性筛选适宜浓度为17%草胺膦1100倍稀释液。研究获得除草剂抗性植株1320株,PCR阳性植株36株,其中30株经Southern斑点杂交后有阳性信号,最高转化效率为9.5%。

简介：异戊烯基转移酶（Isopentenyl-Transferasas，IPT），也称作细胞分裂素合成酶，是植物中细胞分裂素合成的限速酶。JPT在转基因植株中超表达后，会使叶片中的细胞分裂素含量增加，从而延缓叶片衰老。但过高对植物的生长和育性都是有害的。如果将衰老特异性启动子（PSAG）与J刀基因融合，在它的驱动下表达，只有在叶片衰老时才表达合成分裂素。既能延缓衰老又不影响植物的生长发育。以pCAMBIAl301-PMI表达载体为基础载体，用衰老特异性启动子驱动目的基因IPT．用辣椒Flamingobill外植体作受体，采用农杆菌介导的方法转化辣椒。并利用甘露糖筛选体系对辣椒转化体进行筛选．对转基因植株进行分子生物学检测和抗衰老检测。结果表明，共获得82株抗性植株，PCR检测的阳性率约为50％。而在对T1代的PCR检测表明该基因能稳定遗传给下一代。这些经转化的植株具有叶片衰老延缓及植株生命周期延长等现象．花的衰老也有所延缓。T1的株高和侧芽萌发与对照相比无明显差异。

简介：农杆菌渗入法是在植物中瞬时表达外源基因的一种方法,该方法通过在植物叶片上注射农杆菌,使目的基因转入植物细胞中进行快速表达。本文综述了农杆菌渗入法的原理、技术流程、影响因素及其应用,其应用主要涉及外源基因的表达、检测转基因的表达、启动子分析、转录后基因沉默、抑制子功能鉴定、细胞定位以及基因相互作用等方面。随着技术的进一步完善,我们相信该技术将成为转基因育种领域的重要的手段。

简介：高温（〉28℃）可引起含N基因的免疫寄主对TMV抗性丧失,导致TMV系统侵染。本研究以枯斑三生（Nicotianatabacumvar.SamsunNN）烟草为研究材料,采用代谢组学方法,系统研究25℃和31℃条件下,TMV未侵染和TMV侵染12h、24h和48h枯斑三生烟草的代谢差异。应用气相色谱与质谱联用（GC-MS）技术,结合主成分分析（PCA）和正交偏最小二乘-判别分析法（OPLS-DA）对不同温度下代谢产物的差异性进行分析。结果表明：GC-MS技术共检测到49种代谢物包括氨基酸类、糖类、有机酸类、脂肪酸类、醇类以及多胺类等。在25℃常温条件下,TMV侵染枯斑三生烟引起苹果酸、水杨酸、γ-氨基丁酸、脯氨酸和乙醇胺等代谢物含量上调,而在31℃高温处理N基因失活后,TMV侵染导致组织蔗糖和肌醇含量下调、葡萄糖和果糖含量上调以及伴随氨基酸类含量普遍上调。

简介：本研究构建了含有耐草甘膦基因G2-epsps和R79-epsps的双价植物表达载体pCMG2R79-EPSPS，以优良玉米自交系78599和综31的幼胚为受体材料，采用农杆菌介导法将耐草甘膦双价基因G2R79-epsps转入玉米幼胚细胞，以期获得耐草甘膦性更高的转基因玉米植株。目前已获得转基因再生玉米植株32株，经特异PCR检测表明其中7株植株转入了目标基因，阳性率达到21．9％。对得到的阳性植株的T1、T2代进行了跟踪检测，经田间喷施除草剂试验结果表明，获得了可耐草甘膦6％0的玉米材料，即生产上草甘膦田间使用浓度3倍水平的材料，为抗除草剂玉米新品种选育提供了较好的基础材料。

简介：本项研究通过植物基因工程技术，以改变花色为目的，对花卉进行遗传改良，以期产生新的花色品种，来改变现有花卉花色单一、品种缺乏的现状，丰富我市花卉品种资源。在应用转基因技术进行定向改良花色的研究中用的最多也最成功的基因就是：查尔酮合酶基因。查尔酮合酶（Chalconesynthase，CHS）是花色素合成途径中的一个关键酶，它在植物中表达的量可能影响花的颜色。本项目以查尔酮合酶（Chalconesynthase，CHS）基因作为目的基因，以大岩桐为研究对象。具体从矮牵牛（Petuniahybrida）特定发育阶段的花瓣的cDNA中，克隆到查尔酮合酶基因CHSA，进行质粒的重组后，插入到含有花椰菜花叶病毒CaMV35S启动子的植物中间表达载体中pBI121中，转化农杆菌LBA4404。通过农杆菌介导法（之叶盘法）遗传转化大岩桐，具体过程如下：农杆菌LBA4404pBI121chsA的培养→农杆菌与大岩桐叶盘共培养→脱菌筛选→抗性芽的扩繁与继代培养→抗性株的生根筛选→移栽成活。经过研究，成功地得到大岩桐转化植株，其中8个株系的转基因植株经PCR检测呈阳性，证明外源基因已整合进入受体植物。有一株玫红品系植株的花瓣上出现了白色的不规则斑点。

简介：为获得快速生长的泥鳅(Misgurnusanguillicaudatus),研究了泥鳅β-actin基因启动子介导的革胡子鲶(Clariasgariepinus)生长激素(growthhormone,GH)重组基因。采用PCR和RT-PCR技术克隆泥鳅β-actin基因近端启动子、3′-UTR及革胡子鲶GH基因编码区,构建一个长为2418bp的GH重组基因DPRK。首先,构建了以增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因作为报告基因的重组表达载体pAF(pβ-actinpromoter-EGFP),然后转染DF1真核细胞,同时经酶切线性化后显微注射到斑马鱼(Daniorerio)和泥鳅的受精卵中,以评价泥鳅β-actin启动子的启动活性。其次,将重组基因DPRK显微注射到泥鳅受精卵中。结果显示:泥鳅β-actin启动子能在DF1细胞、斑马鱼和泥鳅的受精卵中启动绿色荧光蛋白的表达;泥鳅的荧光表达率(78.44%)显著高于斑马鱼(29.62%);泥鳅受精卵显微注射DPRK20d后,在mRNA水平检测到GH基因的表达。这表明泥鳅β-actin基因近端启动子具有显著的启动活性,且重组基因DPRK能在泥鳅体内表达,为下一步泥鳅的基因工程育种奠定了理论基础。

简介：植物时常受到高盐和干旱等各种各样的环境胁迫，因此植物也进化出了各种防御机制以应对胁迫所带来的毒害作用。脱落酸（ABA）是一种植物激素，调控植物的生长发育并对非生物胁迫产生响应。本研究从经ABA处理的甜辣椒（Capsicumannuum）叶片中鉴定出了一个耐旱基因CaDRT1（DroughtTolerence1）。CaDRT1基因在叶片中的表达受环境胁迫大幅诱导。经ABA处理后，CaDRT1在辣椒叶片中大量表达，表明CaDRT1蛋白在非生物胁迫响应中具有着重要功能。通过病毒诱导基因沉默（VIGS）技术沉默CaDRT1基因后，叶片气孔关闭受限，蒸腾失水量上升，植株受到显著伤害。CaDRT1过表达（CaDRT1-OX）的拟南芥在发芽期、幼苗期及成株阶段均呈ABA敏感的表型。此外，CaDRT1-OX植株呈耐旱表型，其特点是气孔关闭程度高，蒸腾率低，叶片温度高，叶片中干旱应答基因表达量增加。上述结果表明CaDRT1在ABA介导的干旱胁迫响应中起正向调控的作用。

简介：CRISPR/Cas9（Clusteredregulatoryinterspacedshortpalindromicrepeat/Cas9）基因编辑技术在生命科学领域掀起了一场重大的技术革命,它比锌指核酸酶（ZFNs）和转录激活因子效应物核酸酶（TALENs）技术更易于操作,而且更高效。CRISPR/Cas9系统已经被广泛应用到植物科学研究领域中。本实验选取拟南芥MS2为目的基因,构建植物基因编辑系统的表达载体,并通过农杆菌介导的方法转化拟南芥,从而利用CRISPR/Cas9系统靶向敲除拟南芥MS2基因。对转基因后代的MS2测序结果分析表明,在获得的12个阳性转化植株中,发现了5个阳性植株存在基因序列上的新碱基插入,由此形成CRISPR/Cas9介导的拟南芥MS2突变体。这一工作为后续分析其他物种中MS2同源基因的功能研究提供参考依据。

简介：谷胱甘肽－S－转移酶（glutathioneS-transferases，GSTs）是一类广泛分布于生物体的重要解毒酶系。它的功能广泛，主要包括催化还原型谷胱甘肽与有毒亲电子化合物扼合，以增加毒性物质的水溶性而排除体外；作为过氧化物酶，对脂质过氧化产物进行解毒，从而降低氧化应激损伤；及以隔离机制被动结合杀虫剂等。昆虫GSTs主要分为6个已知的基因家族，其中Delta和Epsilon为昆虫特异的家族，已鉴定的抗药性相关基因则主要分属于这两个家族。本文主要对昆虫GSTs的比较基因组学及在杀虫剂抗性中的作用等相关研究进展进行综述。

简介：以植物乳杆菌P-8（Lactobacillusplantarumsubsp.plantarumP-8）亚油酸异构酶为研究对象,通过http：//swissmodel.expasy.org/,http：//smart.embl-heidelberg.de/和vecterNTI等在线工具与软件,对亚油酸异构酶进行生物信息学分析并预测与酶活性相关的位点,预测亚油酸异构酶的3个氨基酸可能为第68位甘氨酸、第107位精氨酸和第172位组氨酸。设计1对含突变的引物,以重组质粒pQE30-LAI为模板,利用PCR介导的定点突变技术构建突变体。经序列比对表明,成功构建了突变体G68A（甘氨酸突变为丙氨酸）、R107L（精氨酸突变为亮氨酸）和H172P（组氨酸突变为脯氨酸）,为进一步研究LAI的结构和功能奠定了基础。

简介：本文综述了在杀虫剂抗性中起重要作用的P450酶系研究的最新进展，内容包括：细胞色素P450酶系基因及其基因的表达与调控，P450介导抗性的分子基础。细胞色素P450表达表现出发育期，组织，品系特异性及可诱导性。P450表达的调控机制复杂，可能受顺式调控元件（如CYP6B1）或反式作用因子（如CYP6A1）或顺式，反式因子的共同调控（如CYP6D1），调控可能涉及转录增强的转录机制或mRNA稳定性增加的转录后机制。P450的超量表达是P450酶系介导抗性的主要机制，P450的氨基酸替换也可能在杀虫剂抗性中起作用。

简介：利用农杆菌介导法将与植物纤维素合成有关的纤维素合成酶基因导入喜树体内,并对影响遗传转化效率的几个因子进行了研究,建立了有效的喜树遗传转化体系。采用预培养的外植体在OD600(0.5)的农杆菌菌液中侵染10分钟,外植体与农杆菌侵染后在再生培养基上与农杆菌共培养三天,然后转入筛选培养基,获得了最佳的转化效率。Southern杂交结果证明UGPase基因已经整合到喜树的基因组中。在最佳的转化条件下获得了6%的转化效率。这个转化系统对于利用遗传转化对喜树进行遗传改良是非常有意义的。

简介：

简介：随着基因功能的深入研究，构建表达载体是研究各基因的功能及其相互关系的第一步。近年来涌现的多种同源重组介导的高效克隆策略极大地方便了载体的构建。简要综述了同源重组介导的克隆方法的研究进展，及其在载体构建中的应用。

简介：科学家已育成一种转基因树,用它造纸不仅能大大节省能耗,而且能减少有毒化学物质的使用。并且,这种树比普通树木长得快。科学家们相信这个突破不仅能促进林业的发展和减轻污染,而且它标志着一个新时代的开始:森林中的树也跟动物和农作物一样能够更全面地为人类服务。用木材造纸的难度在于从木浆里剔除木质素——一种使木质坚硬的强聚合物。这个过程需要使用一些剧毒化学药品和消耗大量能源。

简介：

简介：利用转sck基因高代稳定水稻亲本和组合为材料,研究了外源sck基因的遗传表达特性。结果表明：外源sck和hpt基因都能自交连锁稳定遗传到T11并表达,且连锁基因和表达活性可杂交转移到不育系和杂交组合中,外源sck基因在杂种F2代以单基因显性遗传3：1的模式进行分离,但也出现自交hpt基因丢失,杂交hpt基因甚至sck基因未获得成功转移的现象。田间抗虫性观测表明,转sck基因水稻对钻蛀性螟虫抗性不足,对卷叶螟具有一定抑制作用。外源sck基因在转化或杂交转育的亲本及组合中均获得表达,且具有一定的空间分布特性和基因累加效应,基本为叶片的表达活性高于叶鞘。