简介：采用pGAPZαA为表达载体，SMD1168毕赤酵母为受体系统，构建分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌。按照毕赤酵母偏爱密码子设计Brazzein基因，共设计4对引物，采用SOE—PCR法合成Brazzein基因，构建克隆载体pUC57-Bra与酵母表达载体pGAPZαA—Bra。将重组质粒线性化，电转导人Pichia．pastorisSMD1168中，用高浓度的Zeocin筛选高拷贝转化子。将重组菌株接种于YPD培养基诱导表达，进行SDS—PAGE分析。成功构建了分泌型的Brazzein毕赤酵母重组菌，SDS—PAGE表明，目标蛋白的相对分子量与理论值一致，诱导72h后的目的蛋白表达量达0．12dE。
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