简介:摘要目的探讨人骨髓间充质干细胞体外培养的可靠方法。方法采用人手术切下的骨头标本,运用全骨髓贴壁法分离培养hBMSCs;观察并绘制生长曲线;取生长状态良好的第四代细胞,通过形态学、流式细胞仪检测表面标志物等鉴定hBMSCs;诱导hBMSCs分化为成脂肪细胞,鉴定本实验所分离的hBMSCs是否具有多向分化能力。结果第四代细胞CD29和CD44阳性表达率分别为100%和99.8%,CD31和CD45阳性表达率分别为0.8%和0.4%。流式细胞仪检测证明本研究分离培养hBMSCs的方法可以获得高纯度的间充质干细胞。hBMSCs体外诱导向脂肪细胞分化16d后,镜下可见胞浆内充满圆形脂滴,油红O染色阳性,诱导成脂肪细胞分化率为85.1±3.2%,证实本实验分离的hBMSCs具有多向分化能力。结论采用手术切下的骨性关节炎标本,运用全骨髓贴壁法可获得稳定、均质性良好的hBMSCs,并具有多向分化能力。本方法能为临床上分离、培养人骨髓间充质干细胞提供了另一种可靠的路线。
简介:摘要目的脐血间充质干细胞(HumanumbilicalcordbloodMarrowMesenchymalStemCells,MSCs)在体外特定环境下诱导为脂肪细胞。方法分离培养MSCs,加入特定诱导液,观察MSCs的形态变化,并在诱导第14d后用油红O染色检测MSCs中含有橙黄色脂滴细胞比例,并与单纯低糖DMEM培养的MSCs为对照组。结果在特定微环境中的MSCs诱导培养72h后出现脂滴,第20d时观察80%脐血MSCs在油红O染色示向脂肪细胞分化。对照组MSCs未见明显变化,油红0染色呈阴性结果。结论在特定环境下MSCs可分化为脂肪细胞,为脐血MSCs在组织工程领域发展奠定了实验基础。
简介:目的探讨经鼠尾静脉移植的骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)对大鼠痛风肾的影响,具体为延缓上皮到间叶组织转化(EMT)、促进肾脏细胞分化和生长,以及抗氧化应激等方面的作用。并进一步研究其相应的机制。方法幼年雄性Wistar大鼠随机分为正常组和造模组,造模组采用腺嘌呤200mg/(kg?d)灌胃4周制作痛风肾大鼠模型,造模成功24h后,造模组再次被随机分为3组,分别为磷酸盐缓冲液模型组和BM-MSCs治疗组,BM-MSCs治疗组经鼠尾静脉移植入骨髓间充质干细胞(BM-MSCs是经密度梯度离心法结合贴壁筛选法在体外分离培养而成),同时磷酸盐缓冲液(PBS)模型组经鼠尾静脉注入相同量的PBS。注射6周后,收集大鼠的血液和尿液标本用来测定血肌酐、尿素氮和24h尿蛋白含量;对大鼠肾石蜡标本切片进行H-E染色、糖原染色和马松染色,观察并半定量评分评价各组肾病理情况;免疫组织化学法测定大鼠肾石蜡标本切片中的转化生长因子β1(TGF-β1)的表达水平,Western-Blot法测定肾组织中P38蛋白、P-P38蛋白、硫氧还蛋白还原酶1(TrxR1)的表达情况。数据经过正态性及方差齐性检验后,正常组和造模组两两比较采用LSD-t检验,3组之间比较采用单因素差分析。P<0.05表示差异有统计学意义。结果经腺嘌呤诱导制作的痛风肾大鼠相比正常组大鼠出现明显的肾功能降低,大量蛋白尿以及肾间质和肾小管尿酸结晶沉积,肾间质纤维化、炎症细胞浸润、肾小管上皮细胞坏死、肾小球硬化等,提示痛风肾模型制造成功,并出现了慢性肾功能衰竭;BM-MSCs治疗组较PBS模型组而言,血肌酐水平降低[(88.90±7.89)μmol/Lvs.(117.40±6.13)μmol/L],尿素氮降低[(7.85±0.88)mmol/Lvs.(10.97±1.03)mmol/L],24h尿蛋白减少[(27.72±4.90)mgvs.(54.66±6.72)mg],TGF-β1表达减少[(11.00
简介:目的建立可行的人骨髓间充质干细胞(humanmarrowmesenchymalstemcells,hMSCs)的培养方法,并对其生物学特性进行初步研究。方法于2013年1月—2014年6月采用密度梯度离心法和贴壁法分离培养hMSCs,用免疫组织化学(免疫组化)法鉴定表面标志并分析其核型,光镜观察其生长和形态变化。结果本实验分离的hMSCs纯度高、贴壁好,以长梭形为主,至少在传代培养6代内增殖快,性状稳定。免疫组化染色显示hMSCs表达CD29和CD44,不表达CD45及CD34,核型正常。结论密度梯度离心法可获得增殖活跃且纯度较高的hMSCs,有特征性表型,适合体外较长期的培养hMSCs。
简介:目的体外诱导分化骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells,MSCs)为胰岛样细胞,鉴定诱导细胞并检测其功能。方法取周龄大鼠骨髓细胞,进行MSC培养纯化扩增,用bFGF、EGF、条件培养液、高糖培养液、B27、地塞米松、胰岛素等培养体系诱导MSC向胰岛细胞转化。双硫腙染色鉴定胰岛样细胞;免疫细胞化学鉴定胰岛素抗原表达;Westernblot检测胰岛样细胞胰岛素的表达。结果体外诱导的MSCs由长梭形变成多角形并逐渐聚集成团。双硫腙染色细胞团成亮红色,初步表明为胰岛样细胞。诱导的细胞具有胰岛素抗原表达;Westernblot检测诱导分化为胰岛样细胞的胰岛素表达阳性。结论骨髓间充质干细胞能够分化成胰岛样细胞,并具有分泌胰岛素的功能。
简介:摘要目的探讨MRI导引下靶向注射间充质干细胞治疗股骨头坏死的临床应用价值及治疗效果。方法根据国际骨循环研究学会(AssociationResearchCirculationOsseous,ARCO)骨坏死分期标准,选取Ⅰ、Ⅱ期股骨头坏死20例(31髋),治疗组8例(11髋),对照组12例(17髋),治疗组采用1.5T非开放式MR机对股骨头坏死患者在髓芯减压后行MRI导引下靶向注射充间质干细胞,对照组单纯采用髓芯减压术。结果所有患者均获18个月术后随访,行Harris评分和MRI检查。(1)髋关节Harris评分治疗组由(54.60±9.32)分升至(85.68±7.80)分,优良率为89.3%;而对照组由(56.23±8.23)分升至(68.13±8.75),优良率为61.2%,两组比较差异有统计学意义(P<0.01);(2)髋关节影像学检查治疗组仅1例(1髋)发展为Ⅲ期塌陷,而对照组2例(2髋)发展为Ⅲ期塌陷;MRI测得坏死面积百分比,治疗组由33.12%±7.23下降至12.34±9.78%,而对照组由32.56%±6.34%下降至20.45±8.34%两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论MRI导引下靶向注射充间质干细胞治疗股骨头坏死具有安全、准确、疗效好、无辐射等优点,是一种新的有价值的介入技术,对于早期的股骨头坏死患者有较好的治疗作用。