简介：细胞毒T淋巴细胞抗原-4（CTLA-4）是激活的T细胞表达的一种膜蛋白，属免疫球蛋白超家族成员，它通过与B7分子的结合来阻止共刺激信号的传递，抑制抗原特异性T淋巴细胞的增殖活化，起到抑制免疫反应及诱导免疫耐受的作用。CTLA-4在自身免疫病、过敏性疾病、感染、肿瘤及抗移植排斥等领域具有广阔的应用前景。简要综述了CTLA-4的基因、分子结构，及其与T细胞应答的关系。

简介：目的：建立一种高效的末端限制性片段长度多态性（T-RFLP）方法,检测工程土壤细菌。方法：以深圳和香港两地不同土层（0.5,10,20和30m）的工程土壤为研究对象,提取并纯化总DNA,利用细菌16SrDNA基因通用引物8f-FAM/1492r进行PCR扩增,扩增产物分别用HhaⅠ、HaeⅢ和MspⅠ限制性内切酶酶切,酶切产物经毛细管电泳测序,序列上传至数据库进行分析。结果：经过比对分析,香港段土壤中大约存在细菌141属,235种;深圳段大约存在132属,206种;32个细菌种属只在香港土壤中有分布,3个细菌种属只在深圳土壤中有分布;植物病原细菌有14个种属。结论：建立的T-RFLP方法能够高效、快速地分析工程土壤细菌。

简介：T-DNA插入突变在植物功能基因组学研究中发挥着重要作用,广泛应用于大规模植物基因功能分析,是分离新基因、研究基因功能的有效工具。我们简单介绍了T-DNA插入突变的原理,详细论述了3种T-DNA插入突变载体的应用,并综述了利用T-DNA插入突变克隆新基因的方法,同时指出了T-DNA插入突变存在的问题及其发展方向。

简介：利用同源模建方法预测了t-PAK1区的三维结构。通过结构叠合确定了t-PAK1、K2区,纤溶酶原K1、K4区及UKK区的赖氨酸结合口袋。静电势计算及疏水性分析表明,在t-PAK2区以及纤溶酶原K1、K4区与纤维蛋白裸露的赖氨酸之间存在明显的静电势互补和疏水面契合。确定了影响Kringle区结合口袋与赖氨酸亲和的重要氨基酸,分析了t-PAK1区、UKK区不能结合赖氨酸的原因,由此设计了具有赖氨酸亲和力的新型t-PAK1区及UKK区突变体。利用模拟残基突变技术预测了突变体的结构变化,分析了突变后t-PAK1区及UKK区与赖氨酸亲和力的变化,初步在理论上肯定了设计方案的合理性。

简介：构建了二氢叶酸还原酶（dhfr）选择基因启动子上游无增强子（cnhancer）的组织型纤溶酶原激活剂（t-PA）组合突变体FrGGI真核表达质粒pZLFrGGI。将pZLFrGGI酶切线性化,采用大剂量DNA电击介导法,转染dhfr基因缺陷型中国仓鼠卵巢细胞系（CHO-dhfr-）。用氨甲喋呤（MTX）筛选转染细胞。混合加压后,挑选克隆,在1×10-7mol/LMTX压力下,得到了表达水平达1500～2500IU/106细胞·24小时的细胞株。此细胞株表达水平稳定,形态良好,倍增时间为36小时,且有进一步提高表达水平的潜能,有望发展为工程细胞株。

简介：目的：融合表达表皮生长因子受体（EGFR）胞外功能区,为制备针对该分子的特异性抗体提供可用的靶标抗原。方法：通过PCR扩增EGFR胞外区基因,将其克隆入真核表达载体pABhFc中,重组质粒瞬时转染HEK293T细胞,进行EGFR的瞬时分泌表达,纯化获得电泳纯级的分泌蛋白,并通过ELISA、Western印迹、Biacore3000系统对融合蛋白进行鉴定。结果：经测序证实扩增得到了正确的EGFR胞外区基因序列,SDS-PAGE初步确认获得了单、双体的EGFR胞外区,ELISA检测证实双体融合蛋白hFc-EGFR可与商业化的EGF特异性结合,Western印迹检测证实单体融合蛋白His-EGFR可与商业化抗体特异性结合;经Biacore3000蛋白分子相互作用系统测定,双体融合蛋白hFc-EGFR与商业化抗体爱必妥的亲和力达0.5nmol/L。结论：利用哺乳动物细胞HEK293T分泌表达系统获得了结构正确的单、双体2种类型的EGFR胞外区融合蛋白纯品,将用于抗EGFR特异性抗体的筛选。

简介：目的：构建带Myc标签的LC3B—PLA2基因的真核表达质粒，获得LC3B—PLA2融合蛋白，并应用LC3B—PLA2研究Atg4B对LC3B的切割作用。方法：以本实验室保存的乳腺文库为模板，PCR扩增获得LCgB序列，与PLA2G]O拼接后插入pCMV—Myc载体，用构建的重组质粒转染HEK293T细胞，Western印迹检测融合蛋白的表达，用LC3B—PLA2与Atg4B共转染的方法检测Atg4B对LC3B的切割作用。结果：菌液PCR、重组质粒双酶切及测序均表明重组质粒构建成功，Western印迹结果表明融合蛋白在HEK293T细胞中获得表达，LC3B—PLA2真核表达蛋白能够应用于Atg4B对LC3B切割作用的研究。结论：构建了pCMV—Myc—LC3B—PLA2真核表达质粒，LC3B—PLA2融合蛋白在Atg4B对LC3B切割作用的研究中至关重要，为进一步研究Atg4B在自噬过程中的作用奠定了基础。

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简介：利用基因工程表达的志贺毒素Ｂ亚基纯化产物研究志贺毒素的分子组装机理。首先对ＳｔｘＢ进行了分离纯化，并将蛋白质纯品溶解在磷酸缓冲液中。利用蛋白质交联的方法证实，在磷酸缓冲液体系中ＳｔｘＢ可以自发聚合为不同的分子结构形式（单体至五聚体），并可以与游离和细胞膜表面的受体结合，对志贺毒素全毒素的细胞毒性有竞争抑制作用。结果表明，在没有Ａ亚基存在的情况下，单独的ＳｔｘＢ也可以自发组装为多聚体，说明ＳｔｘＢ具有自身组装的能力。

简介：以pBRTM/HCV-3011模板,通过PCR法扩增ns5a、LISDR(左端序列)和RISDR(右端序列),分别经XhoⅠ/EcoRⅠ、XhoⅠ/HindⅢ和EcoRⅠ/HindⅢ双酶切,连入穿梭质粒pEGFP-N3中,构建重组质粒pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR.对重组质粒进行酶切分析和序列测定.将这2种重组质粒通过电穿孔法转染HeLa细胞,然后在G418选择压力下进行有限稀释法筛选,用RT-PCR和荧光显微镜鉴定.经酶切鉴定和基因测序证实,重组穿梭质粒已插入目的片段ns5a、LISDR和RISDR.RT-PCR和荧光显微镜检测到目的基因的表达.以上结果说明成功构建了真核表达载体pEGFP-N3-ns5a和pEGFP-N3-ns5a-△ISDR,目的基因在HeLa细胞中得到表达,为研究HCVNS5A中是否存在抗干扰素治疗的功能蛋白提供了实验材料.

简介：用纯化的ＣＴＢ后腿肌肉注射免疫小鼠，每次１２．５μｇ，每隔１４天加强一次，共注射三次，末次免疫后两周收集血清，免疫小鼠诱导产生了特异性抗ＣＴＢ抗体。在ＣＨＯ细胞中，免疫小鼠血清能够中和ＣＴ的细胞病变效应；小鼠肠结扎实验表明，抗ＣＴＢ血清能够抑制ＣＴ结合细胞表面受体ＧＭ１神经节苷脂。这表明转基因烟草产ＣＴＢ在小鼠中能够产生抗细菌毒素的保护免疫力。

简介：在新一期美国《科学》杂志对“2008年值得关注的科研热点”的预测中，生命科学就占了5个席位，可以预见，2008年将又是一个生命科学研究热点年。

简介：活性氧（ROS）是生物体有氧代谢过程中产生的一类活性含氧化合物的总称,机体细胞可通过多种途径维持ROS产生与降解的动态平衡。研究表明,活性氧可作为第二信使调节与细胞增殖、分化、凋亡相关的信号转导通路。c-JunN端激酶（JNK）通路可以介导氧化应激、细胞因子、紫外照射等引起的细胞凋亡。另外,κ基因结合核因子（NF-κB）是氧化应激调节的靶因子之一,同样也能诱导促进细胞内的氧化应激反应,还可通过活性氧蓄积抑制JNK的激活。简要综述活性氧对NF-κB和JNK信号通路的调节。

简介：IKK复合物由IKKα、IKKβ和IKKγ组成，是NF-κB通路中的重要分子，主要调控NF-κB通路的活化。近年的研究发现，IKK复合物还存在许多NF-κB非相关性的功能，主要涉及肿瘤发生、应激反应、转录调控、免疫功能及细胞周期调控等方面。IKK复合物的NF-κB非相关性的功能研究集中于IKKα和IKKβ亚基，并且存在激酶活性依赖和非依赖2种作用方式。对于该功能的深入探讨，对全面理解IKK分子的生理病理功能十分重要，并且为IKK分子的研究提出了一个新的方向。

简介：目的：研究脂多糖（LPS）对人血清中补体系统的激活及在小鼠模型中诱导产生白三烯B4（LTB4）。方法：LPS包被ELISA板,利用血清中补体C4、C3沉积实验检测补体成分被LPS活化的情况,通过尾静脉注射小鼠LPS后不同时间点ELISA定量检测LTB4,评价补体系统的活化和炎症因子的产生。结果与结论：血清系统ELISA检测发现LPS可以激活补体系统,且以凝集素途径为主;动物实验中LTB4被LPS诱导后1～3h达到峰值,之后回落。C1INH对血清补体活化和动物模型中LTB4的产生均有显著抑制。

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简介：柳树是东北平原地区重要的造林绿化树种,其被广泛应用于营造用材林、防护林及风景林。朝白B80柳是以朝鲜柳为母本、新疆白柳为父本经人工杂交育种方法选育出的柳树新品种,该品种具有速生、耐寒、耐干旱、耐水湿、抗烂皮病的特性,其10年生平均树高、胸径、材积生长量分别为12.37m、25.94cm、0.3495m3,分别为对照品种垂爆109柳的1.4、2.3、6.61倍,该品种是适宜在东北寒冷、干旱地区大力推广的乔木柳新品种。

简介：目的：建立一种灵敏、特异、快速的ELISA方法，用于猕猴血清中抗死亡受体5（DR5）单克隆抗体的检测。方法：采用双抗夹心ELlSA法，用猴血清吸附的羊抗入IgG包被于96孔酶标板，加入待测样品，用HRP标记的猴血清吸附的羊抗人IgG进行检测，加底物显色，读取D450值。结果：建立了检测抗DR5单克隆抗体的ELISA方法并进行了确证，方法的线性范围为12．5-800ng／mL，定量下限为12．5ng／mL，板内和板间精密度均小于15％，准确度为-4-15％，冻融稳定性和稀释稳定性良好。结论：方法学确证结果表明，本研究建立的抗DR5单克隆抗体检测方法符合新生物制品临床前药代动力学研究指导原则要求，可用于抗DR5单克隆抗体的检测。

简介：用原子力显微镜（AFM）观察线性DNA并探讨其成像条件。用RT-PCR技术扩增柯萨奇B1病毒VP1基因DNA片段，纯化回收后配制成含和不含1mmol/LMgCl2的水溶液，DNA终浓度为100μg/ml。分别取20μl滴加在新鲜解理的云母片上，吸收1min，用滤纸吸去残液，氮气吹干，在室温下采用MultiModeAFMNanoscopeⅢa的敲击模式成像。同时比较新制备和多次使用过的探析所获得图像的质量，对两种探针进行扫描电镜观察。电泳证明获得了0.83kb的VP1基因DNA线性片段，Mg^2+存在时，DNA在云母片上吸附延展较好，所获图像质量优于无Mg^2+时。新制备的探针较多次使用过的探针所获图像分辨率更高。DNA分子的表现宽度为18±2.9nm，高度为0.8±0.2nm。说明AFM能以高分辨率直接观察DNA分子，Mg^2+的存在和高质量的探针有助于获得理想的图象。

简介：克隆河南人免疫缺陷病毒(HIV)感染者HIV-1B型株tat基因完整编码框序列,并分析比较其编码产物的序列结构特点.使用重叠PCR技术,从河南省1名HIV-1感染者外周血标本中扩增出tat基因第一和第二外显子并重组为完整的tat基因序列.获得的HIV-1B病毒株tat基因,第一外显子为263bp,第二外显子为214bp.将该基因编码产物与其他HIV-1株Tat蛋白经DNA软件编辑并翻译成蛋白质,使用ClustalX1.81进行多序列对比分析发现,第一外显子编码产物的3个保守区域的氨基酸组成大致相同,只有少数氨基酸存在差异.由于Tat蛋白不同病毒株间有高度保守的Cys富集区、核心区和碱性氨基酸富集区,tat基因的克隆为研究其功能并以其为靶点设计和筛选抗艾滋病的药物奠定了基础.