简介：摘要目的观察氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜组织中miRNA的表达，筛选与视网膜新生血管（RNV）有关的miRNA。方法80只健康7日龄C57BL/6J小鼠随机分为对照组和OIR组，每组40只。OIR组小鼠构建OIR模型，对照组小鼠不做任何处理。小鼠17日龄时，做视网膜荧光铺片，荧光显微镜下观察小鼠RNV发生情况；做视网膜病理切片HE染色，光学显微镜下计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。取视网膜组织行miRNA芯片分析，检测对照组与OIR组之间差异表达的miRNA，并行PCR验证。所得差异miRNA靶基因和表达谱分别进行基于基因注释（GO）和京都基因与基因组百科全书（KEGG）的富集分析。组间两两比较采用独立样本t检验。结果荧光显微镜及光学显微镜观察发现，对照组小鼠视网膜未见无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核；OIR组小鼠视网膜可见大量无灌注区、新生血管及突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核。两组小鼠突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核数量比较，差异有统计学意义（t=9.025，P<0.05）。miRNA芯片分析结果显示，与对照组比较，OIR组有54个miRNA发生了具有统计学差异的表达。其中，上调者47个，下调者7个。miRNA差异表达倍数大于1.25倍者23个，小于0.75倍者5个。PCR验证结果显示，差异表达倍数最高的5个miRNA表达趋势与芯片分析结果一致，差异均有统计学意义（P<0.05）。GO分析共得到1112个差异有统计学意义的条目（P<0.05）；KEGG分析共得到65个差异有统计学意义的条目（P<0.05 ）。结论OIR小鼠视网膜组织中miRNA较正常小鼠视网膜组织有54个表达差异显著的miRNA；表达差异的miRNA可能不同程度参与了RNV的发生发展。

简介：摘要目的观察慢病毒介导聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子（PSF）对氧诱导视网膜病变（OIR）小鼠视网膜新生血管的抑制作用。方法5日龄C57BL/6J小鼠112只随机分为正常对照组、单纯OIR模型组、OIR模型＋慢病毒空载体处理组（以下简称Vec组）及OIR模型+ PSF慢病毒处理组（以下简称PSF组），分别为16、32、32、32只。小鼠7日龄时，正常对照组小鼠常规环境饲养；单纯OIR模型组、Vec组及PSF组小鼠建立OIR模型。小鼠12日龄时，Vec组、PSF组小鼠玻璃体腔分别注射滴度为1×1011 TU/ml的空载体病毒或PSF慢病毒1 μl。正常对照组和单纯OIR模型组小鼠不再做任何处理。小鼠17日龄时，采用HE染色计数突破视网膜内界膜的血管内皮细胞核；作视网膜铺片，测量各组小鼠视网膜无灌注区相对面积；采用实时定量PCR检测各组小鼠视网膜中NF-E2相关因子2 （Nrf2）和血红素氧合酶1(HO-1）的mRNA相对表达量；采用Western blot检测各组小鼠视网膜中Nrf2、HO-1及PSF的蛋白相对表达量。组间比较采用单因素方差分析。结果正常对照组、单纯OIR模型组、Vec组、PSF组小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数分别为0.00、14.36±5.50、15.67±4.96、8.13±2.09个；视网膜无灌注区面积分别为0.00%、（35.71±2.81）%、（36.57±4.53）%、（15.33±4.75）%。4组间小鼠突破内界膜的血管内皮细胞核数及视网膜无灌注区面积比较，差异均有统计学意义（F=24.87、165.70，P<0.05 ）。组间两两比较，单纯OIR模型组、Vec组较正常对照组突破内界膜的血管内皮细胞核数增多，视网膜无灌注区面积增大；PSF组较单纯OIR模型组、Vec组突破内界膜的血管内皮细胞核数减少，视网膜无灌注区面积减小，差异均有统计学意义（P<0.05 ）。实时定量PCR及Western blot检测结果显示，4组间小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量（F=53.66、83.54）以及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量（F=58.38、52.69、24.79）比较，差异均有统计学意义（P<0.05 ）。组间两两比较，单纯OIR模型组、Vec组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较正常对照组明显降低，PSF组小鼠视网膜Nrf2、PSF mRNA相对表达量及Nrf2、HO-1、PSF蛋白相对表达量较单纯OIR模型组、Vec组明显增加，差异均有统计学意义（P<0.05 ）。结论慢病毒介导的PSF可通过上调Nrf2及HO-1的表达抑制OIR小鼠视网膜新生血管形成。

简介：摘要目的观察聚嘧啶束结合蛋白相关剪接因子（PSF）高表达对糖基化终末产物（AGEs）诱导下RPE细胞损伤的保护作用。方法将体外培养的人RPE细胞分为正常对照组（N组）、空白对照组（N+ AGAGEs组）、空载体对照组（Vec+AGEs组）、PSF高表达组（PSF+AGEs组）。N组RPE细胞常规培养；N+AGEs组只做转染处理但不导入任何外源性基因的RPE细胞联合AGEs诱导；Vec+AGEs组、PSF+AGEs组利用转染试剂脂质体2000将pcDNA空载体或pcDNA-PSF真核表达质粒导入RPE细胞联合AGEs诱导。除N组以外，其余3组细胞进行相应的转染处理，24 h后应用150 μg/ml的AGEs刺激72 h。采用HE染色和Hoechst 33258染色观察PSF高表达对RPE细胞凋亡相关形态改变的影响；通过ROS水平检测分析PSF高表达对AGEs诱导的RPE细胞ROS表达的影响；采用MTT比色法检测PSF高表达对RPE细胞生存力的影响；采用Western blot检测PSF不同作用时间及不同剂量对血红素氧合酶1(HO-1）表达的影响。结果HE染色和Hoechst 33258染色观察发现，N组细胞形态饱满，细胞核呈圆形，细胞质丰富，染色均一；N+AGEs组、Vec+AGEs组细胞体积缩小，嗜酸性染色增强，细胞核致密浓染、固缩甚至碎裂；PSF+AGEs组细胞形态尚饱满，细胞浆染色较均匀，细胞核染色均一。MTT比色法检测结果显示，PSF高表达可有效提高RPE细胞生存力，但该作用可被ZnPP有效拮抗，且差异有统计学意义（F=33.26，P<0.05）。DCFH-DA法检测结果显示，与N+AGEs组、Vec+AGEs组比较，PSF+AGEs组细胞中ROS产量下降，差异有统计学意义（F=11.94，P<0.05）。Western blot检测结果显示，PSF蛋白以时间、剂量依赖性的方式上调HO-1的表达水平。PSF蛋白作用24、48、72 h的HO-1相对表达水平较0 h明显升高，差异有统计学意义（F=164.91，P<0.05）。0.1、0.5、1.0、1.5、2.0 μg PSF蛋白作用下的HO-1相对表达水平较0.0 μg明显升高，差异有统计学意义（F=104.82，P<0.05 ）。结论PSF可能通过上调HO-1的表达而抑制ROS产生，从而对AGEs诱导下的RPE细胞损伤发挥保护作用。