简介：摘要目的探讨缺氧预处理对骨髓间充干细胞(BMSCs)的细胞基本功能的影响及静脉移植缺氧预处理BMSCs在大鼠早期激素性股骨头坏死(SONFH)中的防治作用。方法提取大鼠BMSCs分离培养，流式细胞仪鉴定表面抗原(CD34、CD44、CD45和CD90)，通过细胞计数试剂盒(CCK-8)分析、划痕实验、茜素红及碱性磷酸酶染色对常氧组(No)和缺氧组(Hp)BMSCs细胞功能进行评估。32只SD大鼠随机分为4组，对照组(C组)、模型组(M组)、常氧组(N组)和缺氧预处理组(H组)，M组使用脂多糖[2 mg/(kg·d)]联合甲基强的松龙[20 mg/(kg·d)]构建SONFH模型，N组和H组构建模型的同时分别通过尾静脉注射107单位的常氧培养和缺氧预处理大鼠骨髓间充质干细胞(rBMSCs)，6周后取股骨头固定后进行Micro CT扫描及重建。股骨头脱钙切片后用苏木精-伊红(HE)染色观察并统计骨坏死发生率。两组间均数比较采用t检验，多组间比较采用单因素方差分析(组间两两比较采用LSD-t检验)。结果rBMSCs流式鉴定结果显示：rBMSCs高表达CD44(100%)和CD90(99.4%)，低表达CD34(0.48%)和CD45(0.39%)；CCK-8显示缺氧预处理能够增强BMSCs的增殖能力(t＝7.199，P<0.05)；划痕实验表明Hp组在12 h(t＝2.462，P<0.05)、24 h(t＝2.471，P<0.05)和36 h(t＝3.434，P<0.01)均表现出增强的迁移能力；茜素红染色显示缺氧处理对rBMSCs的体外矿化能力有显著的增强作用(t＝6.722，P<0.05)。碱性磷酸酶(ALP)染色表明缺氧预处理能够显著增强rBMSCs的体外成骨能力(t＝13.37，P<0.05)。动物实验中C、M、N和H组的骨坏死发生率分别为0%(0/16)、87.5%(14/16)、25.0%(4/16)和12.5%(2/16)，移植缺氧预处理rBMSCs能够明显减少SONFH的发生率；HE染色C、M、N和H组的空骨陷窝率分别为(2.765±0.423)%、(30.817±1.203)%、(14.724±1.312)%和(8.487±1.671)%，表明rBMSCs治疗组空骨陷窝的发生率明显下降(F＝286.3，P<0.05)；Micro CT扫描测量结果表明rBMSCs治疗后大鼠股骨头BV/TV、Tb.Th、Tb.N均明显增加(F＝197.6、290.7、68.7，P<0.05)，而Tb.Sp明显减少(F＝123.8，P<0.05)。证明静脉移植rBMSCs能够改善股骨头的微观结构，并且缺氧预处理后的rBMSCs改善作用更加显著(P<0.01)。结论缺氧预处理能够明显改善rBMSCs的增殖、迁移和体外成骨能力，有利于增强rBMSCs对大鼠SONFH的防治作用。

简介：摘要目的探讨两面神激酶2/信号传导及转录激活因子3(JAK2/STAT3)信号通路在地塞米松(DEX)诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡中作用机制。方法将成骨细胞MC3T3-E1分为3组，分别为对照组、DEX组、DEX+AG490组。对照组只加入正常培养基，DEX组加入200 μmol/L的DEX培养，DEX+AG490组预先给予50 μmol/L的AG490处理后加入200 μmol/L的DEX培养。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测细胞活力，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白印迹法检测通路蛋白及凋亡蛋白的表达。组间比较采用t检验。结果对照组、DEX组、DEX+12.5、25、50、75 μmol/L的AG490的细胞存活率分别为(97.74±1.45)%、(52.05±5.50)%、(54.98±3.77)%、(70.99±4.15)%、(81.53±6.43)%、(79.16±7.35)%。表明DEX明显使成骨细胞MC3T3-E1活力降低(t＝11.364，P<0.001)，50 μmol/L JAK2/STAT3通路抑制剂(AG490)明显抑制了DEX对成骨细胞MC3T3-E1活力的降低作用(t＝4.928，P<0.01)。对照组、DEX组、DEX+AG490组的细胞凋亡率分别为(6.067±0.545)%、(26.233±2.631)%和(8.463±1.179)%。表明DEX明显诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡(t＝12.999，P<0.001)，经AG490处理后，DEX诱导的成骨细胞MC3T3-E1凋亡明显受到抑制(t＝10.675，P<0.001)。蛋白质印迹法(Western blot)检测正常组、DEX组、DEX+AG490组p-JAK2蛋白表达分别为1.000±0.323、2.839±0.640、0.286±0.068，p-STAT3蛋白表达分别为1.000±0.245、3.471±0.157、0.618±0.078，bax蛋白表达分别为1.000±0.083、6.571±0.405、3.048±0.905，bcl-2蛋白表达分别为1.000±0.086、0.207±0.040、0.563±0.083，cleaved Caspase-3蛋白表达分别为1.000±0.192、5.685±0.699、3.411±0.247。DEX组较对照组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显增加，bcl-2的表达明显减少(t＝4.429、14.912、11.100、23.561、14.565，P<0.05)，AG490+DEX组较DEX组p-JAK2、p-STAT3、cleaved Caspase-3、bax的表达明显减少，bcl-2的表达明显增加(t＝6.860、28.404、5.262、6.185、6.721，P<0.01)。结论DEX通过JAK2/STAT3信号通路，调节cleaved Caspase-3、bax、bcl-2的表达，诱导成骨细胞MC3T3-E1凋亡。

简介：摘要目的观察β-榄香酮酸(β-EA)对白细胞介素-1β(IL-1β)作用下大鼠软骨细胞增殖、迁移和凋亡的影响。方法提取大鼠原代软骨细胞并使用甲苯胺蓝鉴定，将其用随机数字表进行简单随机分组，分为对照组、IL-1β组、β-EA低、高剂量组。采用细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测软骨细胞活力，采用5-乙炔基-2’脱氧尿嘧啶核苷(EdU)法检测各组软骨细胞增殖水平，Transwell法检测细胞迁移，流式细胞术检测细胞凋亡率，蛋白质印迹法(Western blot)检测大鼠软骨细胞凋亡相关蛋白半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、Caspase-9、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(bcl-2)的表达水平。使用单因素方差分析进行数据处理。结果对正常软骨细胞用不同浓度β-EA处理后，对照组、β-EA低剂量组、β-EA高剂量组的细胞活力分别为97.00%、97.36%、95.80%；按分组处理的对照组、IL-1β组、β-EA低剂量组、β-EA高剂量组软骨细胞活力分别为97.22%、49.57%、60.20%、79.95%；正在增殖的细胞百分比分别为28.38%、9.16%、13.62%、24.56%；细胞迁移数分别为354.67、86.67、136.67、192.67个；细胞凋亡率分别为12.18%、36.74%、24.41%、16.98%。这些结果表明β-EA对正常软骨细胞无明显毒性(F＝0.438，P>0.05)，并对IL-1β作用下的受到抑制的软骨细胞活力具有促进恢复作用(F＝379.200，P<0.05)。IL-1β组中增殖、迁移的细胞明显低于对照组(F＝84.920、117.100，P<0.05)；β-EA低、高剂量组增殖、迁移的细胞数明显高于IL-1β组(F＝84.920、117.100，P<0.05)。IL-1β明显诱导大鼠软骨细胞凋亡(F＝169.600，P<0.05)；通过高、低剂量的β-EA处理后，IL-1β作用下的大鼠软骨细胞凋亡明显受到抑制(F＝169.600，P<0.05)。同时凋亡相关基因Caspase-3、Caspase-9、bax的蛋白水平表达明显降低(F＝111.600、50.830、132.500，P<0.05)，bcl-2明显升高(F＝59.850，P<0.05)。结论β-榄香酮酸可促进IL-1β作用下大鼠软骨细胞增殖和迁移并抑制其凋亡，对软骨细胞具有保护作用。