简介:摘要目的探讨间隙连接蛋白-43(Connexin-43, Cx43)对成骨细胞增殖和成骨分化的影响及调控机制。方法体外分离培养大鼠成骨细胞,在地塞米松作用下以茜素红染色和碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)染色检测成骨细胞的成骨活性;Western-blot检测成骨细胞中Cx43的表达、成骨蛋白Runx2、ALP、Ⅰ型胶原蛋白(collagenⅠtype,COL-Ⅰ)及增殖相关蛋白PCNA、CDK4的表达;免疫荧光染色检测成骨细胞成骨蛋白的表达;CCK8法检测成骨细胞增殖活力。构建慢病毒介导的Cx43基因过表达质粒(Lv-Cx43)并转染成骨细胞,检测成骨细胞的成骨活性及增殖能力。PD98059预处理过表达Cx43的成骨细胞,检测过表达Cx43成骨细胞的成骨活性及增殖能力。结果分离的成骨细胞具备成骨分化能力,1×10-6 mol/L地塞米松处理能够降低成骨细胞钙结节的形成;随地塞米松作用的时间增加,成骨细胞中Cx43、Runx2、ALP、COL-Ⅰ蛋白表达均呈逐渐下降趋势,且PCNA、CDK4及p-ERK1/2表达均下降;正常组成骨细胞在第0、1、2、3、4天的OD值分别为0.316±0.043、0.891±0.623、1.683±0.154、2.315±0.721、2.891±0.323,在地塞米松处理成骨细胞后分别为0.376±0.021、0.657±0.121、1.124±0.285、1.521±0.272、1.987±0.584,地塞米松处理组成骨细胞OD值在第2、3、4天均小于正常组(P<0.05)。对照组、转染空载慢病毒质粒(Lv-NC)组和Lv-Cx43组中Cx43 mRNA的相对表达量分别为0.541±0.086、0.598±0.018、1.000±0.082,Lv-Cx43组中Cx43 mRNA表达水平高于对照组和Lv-NC组(P<0.05)。对照组、Lv-NC组和Lv-Cx43组中Cx43蛋白条带与内参GAPDH条带灰度值的比值分别为0.816±0.737、0.738±0.643、1.145±1.101,与对照组和Lv-NC组比较Lv-Cx43的表达水平增高(P<0.05)。Lv-Cx43组中Runx2、ALP、COL mRNA的表达及相关标志蛋白表达水平均高于对照组和Lv-NC组;Lv-Cx43组中成骨细胞钙结节的数目高于对照组和Lv-NC组。Lv-Cx43+PD98059组中成骨细胞OD值和钙结节的数目低于Lv-Cx43组(P<0.05)。结论在地塞米松作用下成骨细胞的增殖和成骨分化能力明显下降,且细胞中Cx43表达下降;过表达Cx43能够促进成骨细胞的增殖和成骨分化,其调控机制可能通过ERK1/2通路实现。
简介:摘要目的探讨连接蛋白43(connexin 43,Cx43)在大鼠激素性股骨头坏死组织和成骨细胞中的表达变化及调控机制。方法建立大鼠股骨头坏死模型,分别采用MicroCT和HE染色观察骨小梁破坏程度和空骨陷窝发生率;采用RT-PCT和Western blot检测模型组和对照组中Cx43和PI3K/Akt信号通路相关分子及成骨相关蛋白的表达水平;进一步分离大鼠成骨细胞进行体外培养,在地塞米松(dexamethasone,Dex)作用下,采用Western blot法和免疫荧光检测Dex对成骨细胞中Cx43表达的影响;采用Western blot法检测GCs对PI3K/Akt/β-catenin信号通路相关分子表达的影响,并采用Akt激活剂(SC79)和PI3K抑制剂(LY294002)研究Dex对成骨细胞中Cx43表达调控的分子机制;采用免疫共沉淀和siRNA技术研究β-catenin与Cx43之间的调控关系。结果成功建立大鼠激素性股骨头坏死(GC-ONFH)模型,证明Cx43在GC-ONFH模型组中的表达水平显著低于对照组,且Cx43表达水平与PI3K/Akt信号通路相关分子及成骨相关蛋白Runx2、ALP和Collagen I type(COL)表达呈正相关;此外,分离大鼠成骨细胞体外培养,在Dex作用下,随作用时间的延长,成骨细胞中Cx43的表达与p-PI3K、p-Akt和β-catenin表达逐渐下降,且在SC79预处理下,能够显著逆转GCs对Cx43表达的抑制作用,而LY294002能够显著增强GCs对Cx43的抑制作用;且免疫共沉淀结果表明β-catenin表达与Cx43表达之间存在紧密联系,进一步研究表明β-catenin-siRNA能够明显下调Cx43的表达。结论在激素作用下,Cx43在骨组织和成骨细胞中的表达水平显著下降,其可能的机制是GCs通过抑制PI3K/Akt/β-catenin信号通路进而抑制Cx43的表达,为进一步研究Cx43在激素性股骨头坏死发病过程中的作用奠定新的理论基础。
简介:摘要:众所周知,素质教学理念是新时代下教育领域内畅行的先进教学观念。随着我国教学活动的不断发展,新课程教学改革得以产生,而在新课程教学改革的影响下,素质教育理念已经得到了拓展,深入到每一位教育工作者的内心。从素质教育理念的核心出发,其主张在学生教学活动中关注学生核心素养和综合素质的有机培育,关注学生教学方式和教学模式的有机变革。在此教育背景下,笔者以初中物理教学活动中学生核心素养的培育为主题,展开了积极的探索。
简介:摘要股骨头坏死(osteonecrosis of the femoral head,ONFH)是指各种原因所致的股骨头血供受阻导致股骨头骨活性成分死亡,骨坏死发生一死骨吸收一新骨形成是其典型的病变过程。全髋关节置换术(total hip arthroplasty,THA)是绝大多数患者不得不最终选择的治疗方式。尽管ONFH治疗困难,但早期选择合适的保头治疗手段对于延缓THA治疗的时间仍很有必要。目前临床上股骨头坏死保头治疗的手术方式众多,但迄今为止尚无统一的标准。因此,本文就股骨头坏死的流行病学特点、相关危险因素、病理、分期、目前的保头治疗方式以及预后的相关因素进行重点介绍,以进一步增强临床医师对股骨头坏死的认识以及为患者选择更为合适的保头治疗方法提供参考。经文献检索,对我国非创伤性ONFH,男性患病显著高于女性,且以北方居民和城市居民多见,此外糖皮质激素摄入、高脂血症、大量吸烟、酗酒等往往增加了ONFH发生风险;组织学上看,股骨头血供受阻后出现骨成分坏死以及修复的现象;病理分期上,Ficat分期是目前最常用和最直接的分类方法;髓芯减压术、游离骨移植、带血管蒂骨移植、截骨术仍是目前主流的手术方式。患者的年龄、病因、分期等是影响ONFH预后的重要因素,因此术者可根据患者具体病情及影响预后的相关因素酌情选择最为合适的保头治疗方法。