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  • 简介:摘要目的研究肺腺癌转移相关转录本1(MALAT1)靶向调控微小RNA-142-3p(miR-142-3p)导致卵巢癌化疗耐药的机制。方法收集2016年2月至2019年2月陕西省人民医院80对卵巢癌组织及对应非癌正常组织标本,通过实时荧光定量PCR法检测卵巢癌组织和非癌正常组织中MALAT1及miR-142-3p的相对表达量,并分析二者表达的相关性;通过CCK-8实验验证异常表达的MALAT1及miR-142-3p对卵巢癌Hey细胞增殖和化疗药物5-氟尿嘧啶及顺铂敏感性的影响;通过双荧光素酶报告基因实验(分4组:MALAT1 wt组、MALAT1 wt+miR-142-3p mimic组、MALAT1 mut组和MALAT1 mut+miR-142-3p mimic组)检测miR-142-3p与MALAT1的靶向关系;通过RNA免疫沉淀反应实验验证MALAT1与miR-142-3p的靶点。结果在卵巢癌组织和对应非癌正常组织中,MALAT1的相对表达量分别为0.000 52(0.002 56)、0.000 47(0.000 89),差异有统计学意义(Z=2.365,P=0.018);miR-142-3p的相对表达量分别为0.001 19(0.002 69)、0.001 61(0.008 48),差异有统计学意义(Z=2.935,P=0.003);二者在卵巢癌组织中的表达呈负相关(r=-0.474,P<0.001)。miR-142-3p在miR-142-3p mock组的相对表达量明显低于MALAT1+miR-142-3p mimic组(0.004 18±0.001 24 vs. 0.006 51±0.000 28;t=3.174,P=0.017)。MALAT1 wt组与MALAT1 wt+miR-142-3p mimic组的相对荧光富集度分别为2.27±0.86、31.10±6.05,差异具有统计学意义(t=8.172,P<0.001)。Hey细胞转染MALAT1过表达质粒48、72、96 h后,MALAT1过表达组和对照组的吸光度(A)值(0.522±0.021 vs. 0.433±0.021;0.644±0.012 vs. 0.544±0.051;0.887±0.055 vs. 0.698±0.042)差异均有统计学意义(均P<0.05)。Hey细胞过表达MALAT1后,5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时,MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.615±0.036 vs. 0.506±0.042;t=4.432,P=0.002),5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05);顺铂0.01 ng/μl浓度时,MALAT1过表达组的细胞增殖速度明显较对照组快(0.777±0.015 vs. 0.733±0.039;t=2.355,P=0.023),顺铂0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)。Hey细胞过表达miR-142-3p后,5-氟尿嘧啶0.10 ng/μl浓度时,miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组细胞慢(0.512±0.051 vs. 0.744±0.119;t=4.028,P=0.004),5-氟尿嘧啶1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05);顺铂0.10 ng/μl浓度时,miR-142-3p过表达组的细胞增殖速度明显较对照组慢(0.520±0.043 vs. 0.674±0.096;t=3.441,P=0.009),顺铂1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度时显示出同样的趋势(均P<0.05)。采用0.10、1.00、10.00、100.00 ng/μl浓度的5-氟尿嘧啶和顺铂分别处理卵巢癌Hey细胞后,MALAT1过表达组、MALAT1+miR-142-3p组与对照组间的细胞增殖差异均具有统计学意义(均P<0.05),进一步两两比较发现,MALAT1+miR-142-3p组均显著慢于MALAT1过表达组(均P<0.05)。结论MALAT1通过靶向调控miR-142-3p使卵巢癌细胞对5-氟尿嘧啶及顺铂的敏感性降低,导致卵巢癌化疗耐药。

  • 标签: 卵巢肿瘤 氟尿嘧啶 顺铂 转移相关肺腺癌转录物1 微小RNA-142-3p