简介：摘要目的探讨长链非编码RNA (lncRNA)-抗分化非编码RNA(DANCR)对人脂肪来源间充质干细胞(hASCs)成脂、成骨分化能力的影响。方法收集中国医学科学院整形外科医院的3例女性患者腹部脂肪抽吸术后废弃的脂肪组织(年龄25～35岁)，分离培养hASCs。构建DANCR敲减与过表达质粒，利用慢病毒感染的方式在hASCs中敲减或过表达DANCR，将实验分为5组：敲减DANCR的实验组(shDANCR1、shDANCR2)、敲减对照组(shScrmble)、过表达DANCR的实验组(pCDH-DANCR)、过表达对照组(pCDH-GFP)，每组样本量为3例。RT-PCR检测上述5组细胞中DANCR的表达量。将上述5组慢病毒感染成功后的hASCs进行成脂或成骨诱导，成脂诱导7 d进行油红O染色鉴定成脂效果，成骨诱导14 d进行茜素红染色鉴定成骨效果，并应用RT-PCR检测成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin和脂类合成酶基因LPL、GPDH、FASN、ACC1和HSL，以及成骨分化关键转录因子RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达。实验数据均采用均值±标准差表示，2组间数据采用t检验(Student’s t-test)进行比较，P < 0.05为差异具有统计学意义。结果设计的2条shRNA敲减序列均可使hASCs中DANCR的表达显著减少，与对照组比较，DANCR表达量分别下降了86%和74%，差异具有统计学意义( t＝84.07、P <0.001，t＝75.52、P <0.001)。构建的DANCR过表达质粒可以有效增加hASCs中DANCR表达量，与对照组相比，增加了(15.067±1.986)倍，差异具有统计学意义(t＝12.24, P<0.001 )。成脂、成骨诱导实验显示，敲减DANCR会引起hASCs成脂诱导后脂滴数量显著多于对照组，2组敲减组与对照组相比，差异均具有统计学意义(t＝17.24、P <0.001，t＝ 30.68、P <0.001)，成脂分化关键转录因子PPAR-γ、C/EBPα、FABP4、Adiponectin以及脂类合成酶的关键基因LPL、GPDH、FASN、ACC1、HSL的表达都显著高于对照组；而过表达DANCR后会抑制脂滴的形成及上述基因的表达。同样在成骨诱导中，敲减DANCR后hASCs成骨诱导14 d钙结节形成量显著多于对照组，差异具有统计学意义(t＝15.25、P <0.001，t＝24.61，P <0.001)，成骨分化关键基因RUNX2、OCN、OPN、BMP2及ALP的表达也显著高于对照组，而过表达DANCR后成骨诱导14 d钙结节形成量较对照组显著减少(t＝40.81、P<0.001)，成骨分化关键转录因子表达水平也会降低。结论lncRNA-DANCR能够抑制hASCs的成脂、成骨分化，DANCR表达量的变化影响hASCs的成脂、成骨分化效果，可以作为调控hASCs成脂、成骨定向分化的潜在靶点。

简介：摘要目的明确多聚嘧啶序列结合蛋白(polypyrimidine tract binding protein, PTB)在正常人和骨质疏松大鼠骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells, BMSCs)成骨分化中的作用及其机制。方法收集中国医学科学院整形外科医院收治的4例齿槽嵴裂患儿术后废弃骨髓血，原代分离培养人BMSCs并诱导分化为成骨细胞，RT-PCR和蛋白质印迹法检测PTB在诱导分化7 d和14 d的表达水平；应用shRNA技术对人BMSCs中PTB的表达进行敲减，茜素红染色和荧光定量PCR评价其对成骨分化的影响；体外分别应用浓度为10 ng/ml和40 ng/ml的肿瘤坏死因子α(TNF-α) 处理人BMSCs，荧光定量PCR和茜素红染色检测其对PTB表达及成骨分化能力的影响；流式细胞术检测人BMSCs经PTB敲减后细胞内活性氧(ROS)含量。10只6个月龄雌性SD大鼠采用随机数字表法随机分为卵巢切除骨质疏松模型组和假手术组，每组5只，荧光定量PCR检测其BMSCs中PTB的表达变化。各项定量数据以均值±标准差表示，2组间比较应用t检验，P<0.05为差异具有统计学意义。结果BMSCs成骨诱导分化7 d和14 d PTB表达显著升高，敲减PTB并成骨诱导14 d后，成骨标志基因RUNX2和ALP相对表达量显著下降，分别为对照组的0.74±0.15和0.29±0.18倍(t＝3.490、P＝0.039，t＝7.983、P＝0.004)，且茜素红染色阳性的矿化结节形成减少。10 ng/ml TNF-α(t＝3.528, P＝0.039)和40 ng/ml TNF-α(t＝4.306, P＝0.023)均下调BMSCs中PTB表达，并抑制成骨分化。敲减PTB后BMSCs细胞内ROS含量(720.7±129.7)较对照组(1 204.0±300.1) 下降，差异具有统计学意义(t＝4.872, P＝0.040)。相比于假手术组(0.001 66±0.000 18)，卵巢切除骨质疏松模型大鼠BMSCs中PTB的相对表达量(0.001 25±0.000 12)显著降低(t＝3.217, P＝0.032)。结论PTB的表达可促进BMSCs成骨分化，PTB敲减介导的ROS含量下调是其调控BMSCs成骨分化的一个重要机制。