简介：摘要目的探讨低氧环境下通过低氧诱导因子-1α（HIF-1α）调控Notch信号通路对人牙髓干细胞（HDPSC）成牙本质向分化能力的影响。方法组织块酶消化法培养HDPSC，给予氯化钴（CoCl2）诱导的化学性低氧环境，Western blot检测HIF-1α蛋白表达，茜素红染色检测细胞矿化结节形成能力，反转录聚合酶链反应（RT-PCR）检测Notch下游靶基因Hes1与成牙本质相关基因的表达；进一步加入Notch信号通路特异性阻断剂γ分泌酶抑制剂（GSI），观察以上指标的变化。报告基因方法检测HIF-1α对Notch信号通路的调控作用。采用R version 3.5.3软件进行统计分析，计量资料进行正态检验，多组间比较采用单因素方差分析（方差齐）或Kruskal-Wallis H检验（方差不齐），两两比较采用LSD-t检验（方差齐）或Mann-Whitney U检验（方差不齐）。结果（1）CoCl2诱导的低氧条件下HDPSC中的HIF-1α蛋白水平上调，Notch下游靶基因Hes1 mRNA相对表达量为1.46 ± 0.12，相比常氧组（1.06 ± 0.09）显著增高（t = -4.64，P = 0.012）；GSI处理阻断Notch信号通路后，低氧条件下HDPSC中HIF-1α蛋白水平下调，Hes1 mRNA相对表达量降低至0.82 ± 0.14，与处理前相比差异有统计学意义（t = 5.98，P = 0.004）；常氧条件下GSI处理后的HDPSC中HIF-1α蛋白水平也明显下调，Hes1 mRNA相对表达量（0.30 ± 0.09）相比处理前也显著降低（t = 10.08，P = 0.001）；（2）矿化诱导后的茜素红染色结果显示：低氧处理后，HDPSC细胞成牙本质分化能力下降；GSI处理后，成牙本质向分化能力增强。成骨/牙本质相关基因mRNA表达水平检测结果显示：低氧处理后，BSP、OCN和DSPP的mRNA相对表达量分别为0.53 ± 0.14、0.43 ± 0.20、0.48 ± 0.11，相比常氧组（1.21 ± 0.12、1.08 ± 0.19、1.03 ± 0.13）显著降低（tBSP = 6.30，PBSP = 0.003；tOCN = 4.07，POCN = 0.015；tDSPP = 5.67，PDSPP = 0.005）；GSI处理后，低氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为0.99 ± 0.13、1.09 ± 0.13、0.95 ± 0.16，与处理前相比显著增高（tBSP = -4.17，PBSP = 0.014；tOCN = -4.83，POCN = 0.012；tDSPP = -4.30，PDSPP = 0.017），常氧条件下BSP、OCN和DSPP mRNA相对表达量分别为1.73 ± 0.20、1.55 ± 0.08、1.52 ± 0.14，与处理前相比显著增高（tBSP = -3.84，PBSP = 0.027；tOCN = -3.99，POCN = 0.035；tDSPP = -4.43，PDSPP = 0.011）。（3）荧光素酶报告基因结果显示，HIF-1α可调控NICD启动子，使双荧光素酶相对表达活性为5.37 ± 0.12，与对照组（2.09 ± 0.15）相比显著增强（t = -28.92，P<0.001），提示HIF-1α可能使Notch信号通路激活。结论低氧引起HDPSC中HIF-1α升高并可能通过激活Notch信号通路抑制其成牙本质向分化能力。