简介：摘要目的探讨肝素结合蛋白（HBP）对烧伤早期血管通透性改变的影响。方法①临床研究：采集2019年1月1日至8月30日南京医科大学附属苏州医院收治的12例重度烧伤患者入院0.5 h内全血标本，检测白细胞计数（WBC）、中性粒细胞绝对值和比例以及血清HBP水平；以同期8例严重创伤患者作为对照，以明确重度烧伤患者炎性指标及HBP与其他严重创伤患者的差异。留取12例重度烧伤患者入院9 d内血清标本，采用酶联免疫吸附试验（ELISA）检测多糖包被代谢产物黏结合蛋白多糖-1（syndecan-1）和透明质酸（HA）水平。采用线性相关法分析HBP与中性粒细胞比例、syndecan-1和HA的相关性。②基础研究：制备6～8周龄SD大鼠30%总体表面积（TBSA）Ⅲ度烧伤模型，低分子肝素（LMWN）干预组（n＝5）大鼠于伤后即刻经腹部皮下注射200 U/kg低分子肝素钠（2 h 1次，共4次）；烧伤组（n＝5）给予等量生理盐水；正常对照组（n＝5）不给予任何干预。分别于伤后0、2、4、8 h取大鼠外周静脉血检测血清HBP、syndecan-1和HA水平，取大鼠肺组织于透射电镜下观察肺血管内皮细胞多糖包被损伤情况。结果①临床研究结果：12例重度烧伤患者与8例严重创伤患者WBC、中性粒细胞绝对值和比例以及HBP水平均升高，两组WBC、中性粒细胞绝对值和比例差异无统计学意义〔WBC（×109/L）：14.5±6.1比10.8±3.6，中性粒细胞绝对值（×109/L）：12.0±5.9比9.0±4.0，中性粒细胞比例：0.81±0.10比0.79±0.14，均P>0.05〕；但烧伤患者HBP水平明显高于创伤患者（μg/L：192.92±61.73比51.17±23.05，P<0.01）。12例重度烧伤患者伤后血清syndecan-1和HA水平急剧升高，并呈持续升高趋势，9 d达峰值〔syndecan-1（μg/L）：16.02±0.39，HA（μg/L）：106.83±4.90〕。相关分析显示，重度烧伤患者入院1 d血清HBP与中性粒细胞比例、syndecan-1和HA均呈显著正相关（r值分别为0.805、0.732、0.900，均P<0.01）。说明烧伤引起中性粒细胞急剧升高后释放大量HBP，同时血管内皮多糖包被受到严重破坏。②基础研究结果：烧伤组大鼠伤后血清HBP、syndecan-1和HA水平均较正常对照组急剧升高，并随时间延长呈持续升高趋势，伤后8 h达峰值；LMWH干预组血清HBP、syndecan-1和HA水平均较烧伤组明显降低，8 h时差异仍有统计学意义〔HBP（μg/L）：6.47±0.25比12.48±0.08，syndecan-1（μg/L）：19.06±1.48比25.92±3.34，HA（μg/L）：35.76±2.10比54.91±2.64，均P<0.01〕。透射电镜下显示大鼠肺血管多糖包被结构：正常对照组结构连续、分布均匀、致密；烧伤组2 h时结构即明显破坏、脱落，8 h时已基本观察不到多糖包被结构；LMWH干预组结构破坏、脱落现象明显减轻，8 h时仍能观察到多糖包被结构。结论严重烧伤患者早期血管通透性增加，体液大量丢失，与烧伤早期中性粒细胞急剧升高并释放高水平HBP造成内皮细胞多糖包被破坏有关。

简介：摘要目的探讨严重烧伤患者休克期肝素结合蛋白（HBP）的变化及其在体外对人脐静脉血管内皮细胞（HUVEC）和中性粒细胞的影响。方法采用前瞻性观察性研究与实验研究方法。将2020年8—11月南京医科大学附属苏州医院烧伤整形科收治的符合入选标准的20例严重烧伤患者纳入严重烧伤组［男12例、女8例，年龄为44.5（31.0，58.0）岁］，同期招募该单位体检中心体检结果正常的20名健康志愿者纳入健康对照组［男13例、女7例，年龄为39.5（26.0，53.0）岁］。采用酶联免疫吸附测定（ELISA）法检测健康对照组志愿者血浆与严重烧伤组患者伤后48 h内血浆中HBP和组织金属蛋白酶抑制物1（TIMP-1）蛋白表达水平，分别对2组血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达的相关性进行Pearson相关分析。取第4代对数生长期HUVEC进行实验，将细胞按随机数字表法（分组方法下同）分为常规培养的正常对照组（处理下同）与进行相应处理的重组HBP（rHBP）处理12 h组、rHBP处理24 h组、rHBP处理48 h组，采用实时荧光定量反转录PCR法检测细胞中TIMP-1的mRNA表达；将细胞分为正常对照组与进行相应处理的rHBP处理48 h组，采用蛋白质印迹法检测细胞中TIMP-1蛋白表达；将细胞分为正常对照组与加入相应试剂处理的单纯rHBP组、单纯抑蛋白酶多肽组、rHBP+抑蛋白酶多肽组（rHBP终物质的量浓度为200 nmol/L，抑蛋白酶多肽终质量浓度为20 μg/mL），培养48 h，采用ELISA法检测细胞培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平。采用免疫磁珠分选法从前述10名健康志愿者外周静脉血中分离中性粒细胞，将细胞分为正常对照组与加入相应试剂处理的单纯重组TIMP-1（rTIMP-1）组、单纯佛波酯组、rTIMP-1+佛波酯组（rTIMP-1终质量浓度为500 ng/mL，佛波酯终物质的量浓度为10 nmol/L），培养1 h，采用免疫荧光法观测细胞中CD63蛋白表达，采用流式细胞术检测细胞中CD63蛋白阳性表达率，采用ELISA法检测细胞培养上清液中HBP和髓过氧化物酶（MPO）蛋白表达水平。正常对照组均于适宜时间点进行前述相关检测，细胞实验中各组样本数均为3。对数据行χ2检验、Mann-Whitney U检验、Kruskal-Wallis H检验、Tamhane T2检验。结果严重烧伤组患者血浆中HBP、TIMP-1蛋白表达水平分别为404.9（283.1，653.2）、262.1（240.6，317.4）ng/mL，均明显高于健康对照组志愿者的61.6（45.0，68.9）、81.0（66.3，90.0）ng/mL（Z值分别为-5.41、-5.21，P<0.01）。健康对照组志愿者血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达相关性不强（P>0.05），严重烧伤组患者血浆中HBP和TIMP-1蛋白表达呈明显正相关（r=0.64，P<0.01）。与正常对照组比较，rHBP处理12 h组、rHBP处理24 h组、rHBP处理48 h组HUVEC中TIMP-1 mRNA表达水平均显著升高（t值分别为-3.58、-2.25、-1.26，P<0.05）。蛋白质印迹法检测显示，与正常对照组比较，rHBP处理48 h组HUVEC中TIMP-1蛋白表达明显增强。培养48 h，与正常对照组比较，单纯rHBP组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平显著升高（t=9.43，P<0.05），单纯抑蛋白酶多肽组、rHBP+抑蛋白酶多肽组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平均无明显变化（P>0.05）；与单纯rHBP组比较，rHBP+抑蛋白酶多肽组HUVEC培养上清液中TIMP-1蛋白表达水平显著下降（t=4.76，P<0.01）。培养1 h，免疫荧光法和流式细胞术检测的各组中性粒细胞CD63蛋白表达结果趋势一致。培养1 h，与正常对照组比较，单纯rTIMP-1组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均无明显变化（P>0.05），单纯佛波酯组、rTIMP-1+佛波酯组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均明显升高（t值分别为2.41、3.82，5.73、1.05、4.16、1.08，P<0.05或P<0.01）；与单纯佛波酯组比较，rTIMP-1+佛波酯组中性粒细胞中CD63蛋白阳性表达率及细胞培养上清液中HBP、MPO蛋白表达水平均明显下降（t值分别为5.26、2.83、1.26，P<0.05或P<0.01）。结论严重烧伤患者休克期血浆中HBP表达水平增加；HBP可在体外诱导HUVEC分泌TIMP-1，TIMP-1可降低人中性粒细胞CD63分子表达。

简介：无