简介：摘要目的构建靶向肿瘤间质癌相关成纤维细胞活化蛋白(fibroblast activation protein，FAP)的第2代和第4代CAR-T细胞，并比较两者在体内外的性能差异。方法ELISA检测CAR-T细胞的细胞因子分泌情况；手工计数检测其增殖存活能力；Transwell迁移试验检测其趋化性能；流式细胞术检测其亚型分布；荧光素酶生物发光法检测其杀伤效率；小鼠肺癌转移模型评估其安全性和有效性。结果第2代h4BBz CAR-T细胞的CAR表达率为(74.280±4.384)%，第4代h4BBz-7.19 CAR-T为(67.220±4.013)%；h4BBz-7.19 CAR-T细胞能够分泌IL-7和CCL19，使其在体外的增殖能力和趋化能力较h4BBz CAR-T细胞强，存活能力相当。在亚型分布中，两种CAR表达率在CD4＋ T细胞群和CD8＋ T细胞群中均无显著性差异，但h4BBz-7.19 CAR-T细胞中的Naive和T记忆干细胞(T memory stem cell, TSCM)亚群在CD4＋ T细胞群或CD8＋ T细胞群中所占比例均较h4BBz CAR-T细胞高。在杀伤试验中，h4BBz-7.19 CAR-T细胞在低效靶比时显示出较h4BBz CAR-T细胞更强的杀伤效率(效靶比为1∶1、2∶1、5∶1、10∶1、20∶1时的P值分别为：P1∶1＝0.004、P2∶1＝0.000 6、P5∶1<0.000 1、P10∶1＝0.022、P20∶1＝0.116)，且其T细胞表面免疫抑制分子PD-1的表达水平较h4BBz CAR-T细胞低。在NOG小鼠肺癌转移模型中，h4BBz-7.19 CAR-T组小鼠的肿瘤生长较对照组缓慢，其生存时间更长(P＝0.003 8)，且对小鼠体重和脏器无影响。结论本研究构建的靶向FAP的第4代CAR-T细胞通过分泌IL-7和CCL19增强增殖存活、渗透趋化和特异性杀伤活性，并可在一定程度上通过改善肿瘤免疫抑制性微环境以延缓肿瘤生长、延长生存时间，从而为其在临床上的应用提供参考。

简介：摘要目的对1例遗传性抗凝血酶缺陷症患者及其家系进行临床表型和基因型分析，探讨其分子发病机制。方法应用PCR扩增抗凝血酶基因的所有外显子及其侧翼序列，扩增产物纯化后直接测序分析，寻找基因变异位点并排除基因多态性。采用生物信息学软件(mutation taster)预测变异的致病概率。结果先证者与其父亲各凝血指标正常，而抗凝血酶活性及抗原含量明显下降，分别是34%、48%和12.97 mg/dL、15.60 mg/dL；母亲均正常。测序结果显示先证者及父亲AT基因存在g.2736dupT杂合变异。生物信息学软件预测该变异为致病性变异。结论该家系先证者及其父亲是AT g．2736dupT变异所致的Ⅰ型遗传性抗凝血酶缺陷症，该变异为尚未报道过的新变异。