简介：摘要目的探究消皮素D(GSDMD)在胶质瘤发生发展过程中的意义和体外实验中对胶质瘤细胞系增殖、迁移的影响及其分子机制。方法利用生物信息学的方法分析胶质瘤中GSDMD基因的表达特点，及GSDMD表达水平高低同临床预后的关系。采用实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)法检测人胶质瘤细胞U251MG、U87MG、LN229及正常胶质细胞HMC3中GSDMD的表达；运用慢病毒GSDMD基因敲除载体(LV-shGSDMD)与慢病毒空载对照(LV-NC)转染胶质瘤细胞LN229，并筛选稳转株LN229-NC和LN229-shGSDMD；应用qRT-PCR检测GSDMD mRNA的表达水平；细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测LN229-NC、LN229-shGSDMD细胞的增殖能力；采用Transwell检测LN229-NC、LN229-shGSDMD细胞的迁移能力；采用蛋白质印迹法(Western blot)检测LN229-NC、LN229-shGSDMD细胞GSDMD、Nod样受体家族包含pyrin结构域蛋白3(NLRP3)、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-1、白细胞介素(IL)-1β蛋白的表达情况，两组间的比较采用双尾Student t检验。结果在癌症基因组图谱(TCGA)数据库及基因组织表达(GTEx)数据库中，胶质瘤组GSDMD基因表达水平高于对照组中的正常组织(3.62±0.04比2.83±0.01，t＝24.44，P<0.05)，胶质瘤中GSDMD高表达组中位生存时间短于低表达组[2.1年比7.9年，风险比(HR)＝4.5，P<0.05]；胶质瘤中GSDMD、IL-1β、Caspase-1表达水平高于正常组织，且随胶质瘤等级升高而上升。胶质瘤中NLRP3的表达水平同样显著高于正常组织，但同胶质瘤的等级没有明显关联。在细胞实验中，GSDMDmRNA在胶质瘤细胞系U251MG、U87MG、LN229中的表达量显著高于正常胶质细胞HMC3(4.04±0.35、4.76±0.21、6.29±0.28比1.00±0.07，P<0.05)，而LN229高于其他胶质瘤细胞系(F＝200.2，P<0.05)；基因敲除后，LN229-shGSDMD组较LN229-NC组细胞中GSDMD mRNA的表达量下降(0.15±0.04比1.00±0.01，t＝14.32，P< 0.05)；CCK-8实验中，LN229-shGSDMD组细胞吸光度(A)值曲线在LN229-NC组细胞下方，增殖活性下降(t＝4.580，P<0.05)；迁移实验中LN229-NC组细胞迁移效率显著高于LN229-shGSDMD组细胞(393.8±11.61比187.0±6.20，t＝50.25，P<0.05)。与LN229--NC组比较，LN229-shGSDMD组细胞中的蛋白表达水平NLRP3下调(0.923±0.003比0.671±0.004，t＝579.72，P<0.05)、Caspse-1下调(1.221±0.005比0.498±0.001，t＝180.61，P<0.05)、IL-1β下调(1.221±0.005比0.498±0.001，t＝180.64，P<0.05)，与生信分析结果及表型一致。结论GSDMD过表达促进胶质瘤细胞的增殖、迁移，其机制可能同焦亡途径有关。

简介：摘要目的探讨在蛛网膜下腔出血(SAH)早期阶段运用p38抑制剂后神经细胞线粒体蛋白表达的差异。方法采用氧合血红蛋白(OxyHb)刺激Neuro-2a细胞(小鼠来源神经瘤母细胞，购买自中国科学院上海细胞库)，模拟SAH后血液中氧合血红蛋白对于神经细胞的刺激状态，建立体外SAH细胞模型，设立对照组(Con)、蛛网膜下腔出血组(SAH)及p38抑制剂组治疗组(p38+SAH组)，提取线粒体蛋白进行质谱分析，Maxquant软件和Perseus软件进行查库和非标记定量分析，两组间蛋白差异比较应用t检验。对差异蛋白(p38+SAH/SAH组)进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路的富集分析；应用Multiple Experiment Viewer软件进行分层聚类热图分析；STRING在线工具构建出蛋白与蛋白互作网络(PPI)；通过蛋白质印迹法(Western blot)和实时定量反转录聚合酶链反应(RT-qPCR)验证差异蛋白。结果3组中共筛出239个差异蛋白，上调差异蛋白105个，下调差异蛋白134个(符合差异倍数(FC)>1.5或<0.667，P<0.05)。GO富集分析表明，差异蛋白富集在调节丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)的级联正调控、内吞作用、凋亡过程负调控等细胞生物学功能。在KEGG中：差异蛋白主要在p53信号通路、磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)-蛋白激酶B(Akt)信号通路、轴突导向信号等通路富集。通过PPI分析：以Rab7a、Cox5a、Cacybp等蛋白为核心的9个蛋白互作网络SAH组Rab7a的表达低于CON组(蛋白：0.345±0.014比0.226±0.045，t＝13.920，P<0.05；mRNA：1.00比0.76±0.04，t＝9.813，P<0.05)；P38+SAH组中Rab7a的表达高于SAH组(蛋白：0.226±0.045比0.282±0.023，t＝-4.768，P<0.05；mRNA：0.76±0.04比0.95±0.02，t＝-6.802，P<0.05)，与蛋白组学结果一致。结论p38抑制剂并不是通过单一途径改善SAH后神经细胞线粒体功能障碍，而与多种蛋白及信号通路的调控有关。