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  • 简介:摘要目的研究驻景丸加减方含药血清对过氧化氢(H2O2)诱导的人视网膜色素上皮(ARPE)-19细胞上皮-间质转化(EMT)的作用及其机制。方法选取2月龄SPF级雌性SD大鼠30只,采用随机数字表法将其随机分为空白对照组和驻景丸加减方组,每组15只,分别给予生理盐水和驻景丸加减方连续灌胃7 d,以制备空白血清和含药血清。采用SD大鼠制备驻景丸加减方含药血清。将ARPE-19细胞分为正常对照组,模型对照组,空白血清组,2.5%、5.0%、10.0%含药血清组,SB216763组和SB216763+含药血清组;其中前2个组均于正常培养基中培养,后6个组分别于含空白大鼠血清培养基、相应浓度含药血清培养基、10 μmol/L GSK-3抑制剂SB216763培养基以及10 μmol/L SB216763+10.0%的含药血清培养基中培养;正常对照组常规培养,其他各组先常规培养24 h,后加入终浓度200 μmol/L的H2O2继续培养24 h。采用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)法检测细胞活性;Transwell法检测细胞迁移能力;DCFH-DA法检测细胞内活性氧簇(ROS)含量;硫化巴比妥酸法检测细胞内丙二醛(MDA)含量;Western blot法检测细胞中Nrf2通路相关蛋白核因子E2相关因子2(Nrf2)、血红素加氧酶1(HO-1)、醌氧化还原酶1(NQO-1)和EMT相关蛋白转化生长因子β2(TGF-β2)、蛋白激酶B(AKT)、糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)、snail家族锌指转录因子1(SNAIL1)、α平滑肌肌动蛋白(α-SMA)、上皮钙黏蛋白(E-cadherin)的表达。结果空白血清组、2.5%、5.0%、10.0%组细胞存活率总体比较差异无统计学意义(F=0.163,P>0.05)。正常对照组、模型对照组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组、10.0%含药血清组细胞存活率分别为(100.50±5.91)%、(60.87±4.30)%、(73.27±4.46)%、(80.73±5.67)%和(89.90±4.97)%,正常对照组、模型对照组、空白血清组、2.5%含药血清组、5.0%含药血清组和10.0%含药血清组细胞迁移数分别为(84.67±8.33)、(222.33±13.58)、(215.67±10.02)、(174.67±10.60)、(143.67±8.02)和(107.67±6.66)个/视野,总体比较差异均有统计学意义(F=26.628、99.289,均P<0.01)。模型对照组细胞内ROS和MDA含量较正常对照组显著增加,差异均有统计学意义(均P<0.01);各含药血清组细胞内ROS和MDA含量均较模型对照组显著减少,差异均有统计学意义(均P<0.01)。模型对照组细胞内SNAIL1、α-SMA、TGF-β2、p-AKT及p-GSK-3β蛋白相对表达量明显多于正常对照组和各浓度含药血清组,E-cadherin蛋白相对表达量明显少于正常对照组和各浓度含药血清组,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与正常对照组比,模型对照组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与模型对照组比,各含药血清组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2、HO-1和NQO-1蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.01)。与模型对照组相比,SB216763组细胞质Nrf2蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05);与SB216763组相比,SB216763+含药血清组细胞质Nrf2、SNAIL1和α-SMA蛋白相对表达量降低,细胞核Nrf2和E-cadherin蛋白相对表达量升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论驻景丸加减方含药血清抑制H2O2诱导的ARPE-19细胞EMT,可能与AKT/GSK-3β通路的抑制及Nrf2信号通路的激活有关。

  • 标签: 黄斑变性 氧化应激 上皮-间质转化 驻景丸加减方 视网膜色素上皮细胞