摘要
摘要目的探讨细胞色素P450 1A1（CYP1A1）对脂多糖（LPS）诱导巨噬细胞生成一氧化氮（NO）的影响及作用机制。方法采用10 mg/L的LPS诱导野生型C57BL/6小鼠原代腹腔巨噬细胞（PMs）建立炎症反应模型，检测细胞中CYP1A1的mRNA和蛋白表达。体外培养CYP1A1过表达小鼠巨噬细胞株RAW264.7（CYP1A1/RAW），用10 mg/L的LPS刺激细胞，并设阴性对照细胞株（NC/RAW），检测细胞中激活蛋白-1（AP-1）和诱导型一氧化氮合酶（iNOS）的蛋白与mRNA表达以及细胞上清中NO含量。体外培养RAW264.7细胞，用10 mg/L的LPS和100 nmol/L的12（S）-羟基二十碳四烯酸〔12（S）-HETE〕单独或联合刺激RAW264.7细胞，并设空白对照组，检测细胞中iNOS mRNA表达及细胞上清中NO含量，观察CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞生成NO的影响是否与于其代谢产生的12（S）-HETE有关。体外培养CYP1A1过表达同时羟基化酶活性突变的RAW264.7细胞（CYP1A1m/RAW），用10 mg/L的LPS刺激细胞，并设CYP1A1/RAW细胞对照组，检测细胞中iNOS mRNA表达及细胞上清中NO含量，观察CYP1A1羟基化酶活性是否参与CYP1A1对LPS诱导巨噬细胞NO生成的调控。结果与磷酸盐缓冲液（PBS）对照组比较，LPS刺激2 h起小鼠PMs细胞中CYP1A1 mRNA表达即明显升高，并持续至12 h到达峰值〔CYP1A1 mRNA（2-ΔΔCt）：6.41±0.98比1.00±0.00，P<0.05〕，6 h CYP1A1蛋白表达也显著增强，并在24 h达高峰，说明LPS诱导巨噬细胞炎症反应时CYP1A1表达水平发生变化。与NC/RAW+LPS组相比，CYP1A1/RAW+LPS组细胞中iNOS mRNA表达及NO的生成均显著增加，分别于12 h和24 h达峰值〔12 h iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：54.42±8.21比24.22±3.89，24 h NO（μmol/L）：66.52±4.09比41.42±2.09，均P<0.05〕，同时iNOS蛋白和AP-1磷酸化亦明显增强，说明CYP1A1可能通过促进AP-1活化和iNOS表达增加，从而使NO生成增多。给予LPS单独或联合12（S）-HETE刺激RAW264.7细胞后，细胞中iNOS mRNA表达和NO的生成并无明显改变，12（S）-HETE+LPS组与LPS组相比差异无统计学意义〔12 h iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：34.24±4.07比34.35±4.01，24 h NO（μmol/L）：44.02±3.14比44.56±3.21，均P>0.05〕，说明CYP1A1对NO生成的调控作用可能并不是通过12（S）-HETE而实现的。与CYP1A1/RAW+LPS组相比，CYP1A1m/RAW+LPS组细胞中iNOS mRNA表达及NO的生成差异无统计学意义〔12 h iNOS mRNA（2-ΔΔCt）：52.11±6.84比50.21±5.19，24 h NO（μmol/L）：60.42±4.14比52.01±5.12，均P>0.05〕，说明CYP1A1对NO的调控与其羟基化酶活性无关。结论LPS可显著上调巨噬细胞中CYP1A1表达水平。CYP1A1过表达可通过活化AP-1/iNOS通路促进活化的巨噬细胞生成NO，这种作用与其羟基化酶活性及代谢产物12（S）-HETE无关。
出版日期
2020年08月10日（中国期刊网平台首次上网日期，不代表论文的发表时间）
