高效液相色谱法测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量

(整期优先)网络出版时间:2023-03-14
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高效液相色谱法测定盐酸达泊西汀中对映异构体含量

贾志祥1 ,曹元敏1 ,叶丹1

 (1 江苏联环药业股份有限公司 江苏 扬州 225000)

摘要:目的:建立高效液相法测定盐酸达泊西汀中对映异构体的含量方法。方法:色谱柱为CHIRALCEL OJ-H,规格为25cm×0.46cm, 5μm,流动相由正庚烷-乙醇-二乙胺组成,正庚烷与乙醇的体积比为95:5,二乙胺的体积为正庚烷和乙醇总量的0.1%;柱温35℃,流速1.0mL/min;检测波长为220nm;结果:专属性考察结果显示分离度较好,在0.112~1.342µg/mL浓度范围内盐酸达伯西汀及对映异构体线性关系良好;进样精密度RSD%<2.0%、溶液稳定性RSD%<2.0%及准确度试验结果为99.5%,RSD%(n=9)为2.9%;且精密度及耐用性良好。结论:本发明检测方法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸达泊西汀原料药中对映异构体,有利于提高盐酸达泊西汀的产品质量,提高患者用药安全性。

关键词:高效液相法;盐酸达泊西汀;对映异构体、准确度

盐酸达泊西汀,化学名为(+)(S)-N,N-二甲基-α-[2-(1-萘氧基)乙基]-苯甲胺盐酸盐,是一种选择性的5-羟色胺再摄取抑制剂,临床主要用与治疗早泄,具有吸收迅速、起效快、半衰期短等特点[1-3]。盐酸达泊西汀的这种药动学特点可以使药物释放最大化,并且为期望口服治疗早泄的患者提供了一种选择,使其成为首个获准用于早泄的口服处方药。

盐酸达泊西汀分子结构中存在一个手性中心,具有对映异构体,具有药理活性的为S构型[4-7]。盐酸达泊西汀在合成过程中由于杂质去除不完全会影响药物的纯度和质量。因此,实现盐酸达泊西汀异构体的检测分离对原料药及制剂的生产和贮存具有重要的意义。

本研究建立高效液相色谱法[8]测定盐酸达泊西汀中对映异构体的含量,并对该方法进行了验证。

1试剂与仪器

1.1试剂

正庚烷(欧姆尼);乙醇(欧姆尼);二乙胺(欧姆尼);盐酸达泊西汀(江苏联环药业股份有限公司自制产品);盐酸达泊西汀对映异构体(江西埃菲姆科技有限公司)

1.2仪器

高效液相(Agilent 1260);色谱工作站(ChemStation ECM); 电子天平(梅特勒)

2方法与结果

2.1色谱条件

色谱柱:CHIRALCEL OJ-H(25cm×0.46cm, 5μm);流动相由正庚烷-乙醇-二乙胺组成(950:50:1);柱温35℃,流速1.0mL/min;高效液相色谱仪检测器的检测波长为220nm。

2.3专属性

2.3.1系统适用性测定

取盐酸达泊西汀适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成每1mL中含1mg达泊西汀单一成分的贮备溶液,再稀释制成1µg/mL的单一定位溶液。

取盐酸达泊西汀对映异构体适量,精密称定,加溶剂溶解并稀释制成达泊西汀和达泊西汀对映异构体的浓度为50µg/mL的混合溶液。

精密称取盐酸达泊西汀适量,加混合溶液1mL置10mL容量瓶中,加溶剂溶解并稀释制成达泊西汀1mg/mL和达泊西汀对映异构体5µg/mL的混合溶液,即系统适用性溶液。

分别取5µL注入高效液相色谱仪,考察各成分的分离情况。结果可知,在220nm检测波长下,达泊西汀与各杂质之间能很好分离,各物质间最小分离度5.26,溶剂峰不干扰已知杂质和主成分测定。

2.3.2破坏性试验

破坏前溶液:取盐酸达泊西汀适量,置于10mL容量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,为破坏前溶液。

光照破坏溶液:取盐酸达泊西汀适量,置于10mL容量瓶中,加适量溶剂溶解,用溶剂稀释至刻度,摇匀,紫外灯下光照12h,作为光照破坏溶液。

高温破坏溶液:取本品适量,置于10mL容量瓶中,于100℃加热4h,加适量溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,作为高温破坏溶液。

分别取以上供试液5µL注入色谱仪,记录色谱图,结果见图1。

图1 2a破坏前样品色谱图;2b光照破坏色谱图;2c高温破坏色谱图

结果显示:(1)在各破坏条件产生的降解产物与主峰及对映异构体峰能完全分离,从保留时间看降解物也不干扰测定。(2)本品经过高温、光照破坏,对映异构体几乎无变化。(3)主峰破坏变化量与其含量变化基本一致,样品经不同条件破坏后检出的总峰面积基本相似,物料回收率在90%-110%以内,说明破坏前后物料基本平衡。

2.4线性

取系统适用性混合溶液制成每1mL含有10μg的达泊西汀和达泊西汀对映异构体的贮备液Ⅰ,逐级稀释,配制见表1。以峰面积A为纵坐标、浓度C为横坐标作线性回归。结果表明在0.112~1.342µg/mL浓度范围内盐酸达伯西汀及对映异构体线性关系良好;盐酸达伯西汀线性方程A=34.1679C+0.1424,r=0.9999,盐酸达伯西汀对映异构体线性方程A=33.9485C+0.1696,r=0.9999,校正因子f=1.01。

表1 线性溶液配制

样品

贮备液Ⅰ(mL)

2#

3#

配制过程

1#

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5.0

/

10mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

2#

/

/

5.0

10mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

3#

1.0

/

/

20mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

4#

2.0

/

/

25mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

5#

1.0

/

/

10mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

6#

3.0

/

/

25mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

7#

3.0

/

/

20mL容量瓶中,用溶剂稀释至刻度,摇匀;

2.5定量限和检测限试验

取10μg/mL的盐酸达泊西汀对映异构体溶液。用稀释法测其定量限(S/N≥10)、检测限(S/N≥3),结果见表2。由表2可知,对映异构体和主成分的定量限与检测限符合检查要求。

表2 定量限检测限试验结果

样品名称

定量限浓度(μg/mL)

与检测浓度之比

检测限浓度(μg/mL)

与检测浓度之比

达泊西汀

0.118

0.012%

0.059

0.006%

对映异构体

0.236

0.024%

0.118

0.012%

2.6进样精密度

取系统适用性试验项下50μg/mL混合溶液2mL置10mL容量瓶中,制成10μg/mL溶液作为进样精密度溶液,连续进样6次,记录峰面积。结果显示主成分和各杂质进样精密度良好(RSD<2%),重复性良好。

2.7溶液稳定性测试

取系统适用性试验项下50μg/mL混合溶液2mL置10mL容量瓶中,制成10μg/mL溶液作为对照稳定性溶液;配制含达泊西汀约1mg/mL供试品溶液。精密量取5µL分别于0h、2h、4h、6h、8h、10h注入高效液相色谱仪,考察其日内稳定性。对照品溶液10h内主成分RSD%为0.69%,对映异构体RSD%为0.76%;供试品溶液中对映异构体及主成分在溶剂中于8h内稳定性良好。

2.8重复性

取盐酸达泊西汀,按照对映异构体检测方法,重复测定6次。结果显示样品对映异构体重复性良好。

2.9准确度试验

精密称取盐酸达泊西汀对映异构体适量,用溶剂溶解并定容,得到含10µg/mL的达泊西汀对映异构体贮备液。分别精密称取盐酸达泊西汀10mg置于10mL量瓶中,精密吸取达泊西汀对映异构体贮备液1mL、2ml、3ml至量瓶中,用溶剂溶解并稀释至刻度,摇匀,分别作为对映异构体加样回收率50%、100%、150%溶液。每个限度宁都平行配置3份。

吸取上述样品各5µL进样,记录各杂质峰面积,计算各杂质回收率及RSD。对映异构体的回收率范围为96.82%-104.99%,平均值为99.5%,RSD为2.9%(n=9),回收率良好。

2.10中间精密度

取盐酸达泊西汀,按照对映异构体检测方法,分别由不同分析人员于不同时间使用同一仪器进行对映异构体测定。测定结果显示不同分析人员于不同时间使用同一仪器测定结果无明显差异,中间精密度良好。

2.11耐用性试验

按照对映异构体检查方法,在测定条件有小的变动(流动相流速1.00±0.05mL/min、柱温35±2℃、不同比例(97:3、93:7))下考察系统适用性试验是否符合要求。测定结果可知,在测定条件有小的变动下,系统适用性试验能满足要求,各杂质间分离度>4.0,表明了耐用性良好,对映异构体检出量重现性良好。

3讨论与结论

本研究通过对流动相、波长、色谱柱等条件的考察,建立了达泊西汀对映异构体的HPLC检测方法。

本方法高效液相色谱法能够快速、有效、准确和可靠的分离检测出盐酸达泊西汀原料药中对映异构体,有利于提高盐酸达泊西汀的产品质量,提高患者用药安全性。

参考文献

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