简介：目的探索小鼠基因组39个微卫星的PCR条件,评价微卫星在小鼠遗传检测中的运用.方法采用梯度法探索39个微卫星的PCR条件;选择本中心不同来源及引种时间的C57BL/6、BALB/c、DBA/2J、CBA/N、FVB/NJ、ICR共6个品系(8个组)小鼠,每组采用10只个体的鼠尾,提取DNA并混合成DNA池,用39个微卫星扩增后电泳观察、比较种系纯度.结果小鼠微卫星的PCR条件差异较大,Mg2+浓度多数在1.5mmol/L左右,退火温度多数在59℃左右.在6个品系小鼠的39个微卫星位点中,C57BL/6、BALB/c、DBA/2J都是纯合的;其余品系有1～3个杂合位点.BALB/c在D5Mitl68、D8Mit320、D13Mit262三个位点,DBA/2J在D14Mit205位点与数据库记录有差异.结论本研究为小鼠39个微卫星提供了候选的PCR条件,并对6个品系小鼠的微卫星概貌及微卫星的运用价值进行了探讨.

简介：以悬钧子皮下盘菌等总基因组DNA为皮下盘菌属(HypodermadeNot.)及其近似类群RAPD体系优化的模板,对模板DNA浓度、dNTPs浓度、Mg2+浓度、引物浓度、TaqDNA聚合酶浓度等反应体系以及退火温度和时间、延伸时间、循环次数等扩增程序条件进行优化,寻找出适合此类菌物RAPD-PCR反应的最佳反应体系和最佳扩增程序.

简介：在人教版高中《生物·选修3·现代生物科技专题》关于PCR的教学中，有几个问题会经常困扰教师和学生。下面就列举这些问题并作以解答。

简介：在利用ISSR技术分析齿裂菌属和皮下盘菌属遗传多样性的研究中，为获得条带清晰、重复性好的ISSR扩增结果，对影响ISSR—PCR的条件进行了筛选，确定了此类菌物ISSR—PCR反应的最适宜条件：在15μLPCR反应体系中，10倍Taq酶缓冲液1．5μL，DNA模板8ng／μL，MgCl22．5mmol／L，dNTP0．15mmol／L，引物浓度0．4μmol／L，Taq酶1．00U，ddH2O9．0μL。最佳退火温度因不同的引物而定，最佳循环次数为35次。

简介：目的探索均匀设计在优化实时定量PCR检测条件中的应用,确立心钠素基因实时定量的最佳条件。方法以乳鼠心肌细胞cDNA为模板,退火温度和引物浓度为影响因素,应用均匀设计法探索影响心钠素基因实时荧光定量PCR的扩增条件;量化不同实验条件下的扩增效果,在最优的扩增条件下建立ANP基因定量扩增的相对标准曲线,并检测扩增效率。结果通过均匀设计法的试验设计,用8个试验点,完成了对温度和引物浓度2因素8水平的实验条件优化,建立了ANP基因实时定量PCR检测的最佳组合,为退火温度59.2℃、引物终浓度200μM。结论均匀设计是一种简便易行、快速经济的实时定量PCR检测条件的优化方法。

简介：摘要为确定PCR(聚合酶链反应)扩增葡萄糖激酶基因启动子区，对影响PCR的实验因素进行了系统研究。研究结果表明最佳引物浓度为0.3μmol/L；以1U酶量效果最满意；最适dNTP浓度为167μmol/L；最适Mg2+浓度为1.5mmol/L。以上参数偏离最适条件将会导致实验失败。

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简介：目的探讨生殖支原体在非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性宫颈炎(MPC)中的发病情况。方法应用聚合酶链反应对236例STD门诊的非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性宫颈炎(MPC)患者泌尿生殖道标本进行了生殖支原体的检测。结果生殖支原体的阳性检出率为17．8％。结论生殖支原体在性病高危人群中有一定发病率，可引起非淋菌性尿道炎(NGU)／粘液脓性寓颈炎(MPC)。

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简介：1985年Cetus公司的Mullis发明的聚合酶链反应（PolymeraseChainReaction，PCR）是现代分子生物学研究中的一项非常重要的技术，它可在短时间内在试管中获得数百万特异DNA序列的拷贝，从而很容易地对目的基因进行分析、鉴定以及其它操作。这一技术现已广泛应用于生物学的各研究领域。PCR的定量实质是核酸的体外扩增，当人们利用技术扩增出大量的特异DNA序列后，还必须对这些PCR产物进行定性或定量检测，特别是临床检验中，定量分析PCR产物可以为临床诊断、疗效观察等提供更为准确的信息。另外，在研究基因的表达调控研究中，经常利用RT-PCR定量检测某一特定的转录mRNA，因此，建立灵敏、准确、重复性好的PCR产物定量检测法是目前PCR及其相关技术研究的特点，电是定量PCR技术的基础。本文将对这一技术近年来的研究进展状况作一简要综述。

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简介：免疫PCR基本原理与ELISA相似，即用一段可扩增的DNA分子代替ELISA中酶放大检出信号,建立了直接免疫PCR的检测蓖麻毒素技术，实验结果表明，其灵敏度达1pg／ml，比ELISA方法灵敏度高10^3倍.

简介：目的：用荧光定量聚合酶链反应（FQ－PCR）法准确地定是检验血清中乙型肝炎病毒（HBV）的数量和免疫指标，以指导临床。方法：采用HBV－DVAFQ－PCR诊断试剂盒，以一种完全闭管式的PCR和荧光探针杂交技术组合所产生的实时检验定量PCR方法，检测了58例临床血清标本。结果：经FQ－PCR检测，9例HBV的HBsAg、HBeAg、HBcAg、HBcAb都阳性标本，其HBV－DNA的阳性率为100％，平均HBV－DNA拷贝数为2．0×10^8/ml；16例HBsAg、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为62．5％（10例），平均拷贝数为5．2×10^5/ml，而常规PCR只有33％的阳性率；7例HBsAb、HBeAb、HBcAb都阳性的标本，其阳性率为14．3％（1例），平均拷贝数为4．7×10^3ml。结论：HBV－DNA的FQ－PCR检测较常规PCR更具有较高的灵敏度和特异性，且定量准确，结果可靠，能够避免PCR后处理导致物假阳性污染，可以真实反映HBV的感染和低复制状态，对于乙型肝炎的临床诊断，治病方案的选择和疗效观察有较大的指导意义。

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简介：摘要：本文介绍了PCR实验室设计的基本要求及不同布局设计，并着重强调设计过程中需要关注的重点。

简介：结果电泳检测及纯化后DNA产物测序分析均显示TDPCR扩增产物条带特异性、效率较普通PCR扩增产物高,因此我们在VHL基因突变筛查中使用了普通PCR和TDPCR两种方法,在许多普通PCR无产物的基因扩增

简介：本实验通过合成与原有下游引物（Ｂ）相似的一条新引物（Ｂ’），经聚合酶链反应（ｐｏｌｙｍｅｒａｓｅｃｈａｉｎｒｅａｃｔｉｏｎ，ＰＣＲ）扩增出比原ＢＣＲ－ＡＢＬｃＤＮＡ序列减少了４个碱基的参照物，达到定点诱变的目的。经酶切分析证明，两型ＢＣＲ－ＡＢＬｍＲＮＡ均可通过此方法得到相应的ｃＤＮＡ参照物。参照物和特测模板的共扩增产物可通过毛细管电泳达到基线分离，证明了其可行性。该参数物可用于慢性粒细胞白血

简介：目的建立检测常见丝状真菌感染病原菌的PCR-RFLP和多重PCR方法。方法建立以PCR技术为基础的限制片段长度多态性（RFLP）方法,首先用真菌通用引物扩增丝状真菌的ITS区,然后用限制性核酸内切酶对PCR产物进行酶切。用4种丝状真菌的特异性引物建立多重PCR体系,用该体系检测单模板、双模板和三模板的扩增情况,并测定该体系的特异性和敏感性。结果用PCR-RFLP技术能够鉴别5种常见丝状真菌,多重PCR能够根据扩增片段的不同鉴别菌种,在合适的反应条件下,对单模板、双模板和三模板均能扩增出目的片段。结论PCR-RFLP和多重PCR技术能够快速鉴定丝状真菌感染病原菌,有临床应用的良好前景。

简介：摘要：目的  探索新型冠状病毒核酸检测PCR扩增试剂配制后于不同条件下保存对检测结果的影响。方法  按照新型冠状病毒2019-nCOV核酸检测试剂说明书反应体系的配制方法配制一批PCR扩增试剂并根据使用量进行分装至PCR反应管中，于当日检测一批样本（第1天），剩余试剂分为两组A和B，A组置于4℃冷藏保存，B组置于-20℃冷冻保存备用；以后每天分别对第1天检测的样本使用两组试剂同时检测，记录检测结果，连续检测5天，计算内标（RNP）CT值的CV及每日检测结果与第1次检测结果的差异，评价其稳定性及结果符合率。结果  从第1天至第6天A组试剂检测样本RNP CT值CV-A为3.32%；从第1天至第6天B组试剂检测样本RNP CT值CV-B为2.62%；A组试剂第2天至第5天检测结果与第1天比较，符合率-A分别为：82.61%、75.36%、78.26%、78.26%、73.91%，平均值为77.68；B组试剂第2天至第5天检测结果与第1天比较，符合率-B分别为：78.26%、94.20%、94.20%、81.16%、71.01%，平均值为83.77%。结论  样本分装-70℃超低温保存后使用A、B两组试剂检测，内标CT值CV均小于5%，对检测结果无影响；A、B两组试剂检测样本符合率B组优于A组，但符合率均未达到100%，证实新型冠状病毒核酸检测PCR扩增试剂应根据当批检测样本量进行现配现用，若因提前配制未使用完的试剂，无论置于4℃冷藏保存还是置于-20℃冷冻保存，均有可能对检验结果产生假阴性或假阳性。