简介：为研究黄金茶出芽早的分子机制，本研究采用SMART-RACE技术，获得了与解除休眠相关的转录因子CsDAM2基因的全长eDNA序列，并进一步对该氨基酸序列进行了生物信息学分析。研究发现CsDAM2基因全长为1386bp，序列分析表明，该序列含有一个完整的编码区，大小为657bp，编码区GC含量为50．45％。此编码区可以编码分子量为24．86kD的亲水性蛋白，该蛋白由218个氨基酸组成，理论等电点（pI）为8．96。黄金茶CsDAM2蛋白有11个磷酸化位点，属跨膜蛋白，与毛白杨DAM3的相似性为71％，与已登录茶树MADS．box蛋白的一致性为35％。本研究为进一步揭示黄金茶春芽萌发早的分子机制提供了理论依据。

简介：硬酯酰辅酶A脱氢酶（Stearoyl-CoADesaturase,SCD）是参与脂肪酸脱氢反应的限速酶和关键酶,此酶编码基因SCD对增加膜磷脂的不饱和脂肪酸成分,提高细胞膜在低温下的流动性发挥重要作用,可能是抗寒过程中的关键基因成员。本研究采用cDNA末端快速扩增技术（RapidAmplificationsofcDNAEnds,RACE）克隆了鲤（Cyprinuscarpio）脑组织CcSCD基因的全长cDNA序列,采用实时荧光定量PCR技术检测该基因在低温（6℃）和常温（23℃）条件下的转录表达差异,对其蛋白编码序列的结构和功能进行了预测分析。结果显示,CcSCD基因cDNA全长2618bp,包含一个由324个氨基酸残基组成的长度为975bp的阅读框（ORF）;蛋白分子进化树显示鲤的SCD和草鱼（Ctenopharyngodonidella）的SCD蛋白同源性最高,相似性达88%;实时荧光定量结果表明,低温刺激下（6℃）,CcSCD基因表达水平是常温条件下（23℃）的13.9倍,差异非常显著（P〈0.01）。本研究旨在为今后构建表达载体,通过遗传操作等研究手段鉴定其抗寒功能奠定基础。

简介：背景:肝纤维化病程迁延且药物治疗效果不理想,基因治疗将成为这一领域研究的热点.研究显示白细胞介素(IL)-10对肝脏具有保护作用,可阻止肝纤维化的发生、发展.目的:克隆并鉴定Sprague-Dawley(SD)大鼠IL-10基因的全长cDNA,为进一步构建大鼠IL-10腺病毒重组子和肝纤维化基因治疗的研究奠定基础.方法:自行设计IL-10上下游引物,以逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)从SD大鼠脾脏单核细胞中扩增编码大鼠成熟IL-10肽链的cDNA片断.扩增产物与连接载体pMD-18T连接后转化感受态菌DH5α,构建重组载体pMD-18T-IL-10.结果:以SD大鼠脾脏单核细胞总RNA为模板,RT-PCR扩增出大小为540bp的大鼠IL-10cDNA片断.所构建的重组质粒经HindⅢ+KpnⅠ双酶切显示含有目的基因片段,测序结果证实扩增出的DNA片断与大鼠IL-10基因序列相符,表明编码区无基因突变.结论:成功地克隆了大鼠IL-10基因的全长cDNA,并构建了重组载体pMD-18T-IL-10.

简介：安全长大，是我们每一个做子女的责任和义务。因为，我们是含苞待放的花朵，是振翅欲飞的雄鹰，是冉冉升起的朝阳。父母、老师对我们寄予厚望，我们是父母注视的焦点，我们是老师培养的重点对象，父母和老师都在尽全力提高我们的学习和生活水平，希望我们早日成为国家的人才。

简介：摘要目的描述一株新鉴定的流行重组型HIV-1 CRF103_01B在北京的检出情况，并分析其近全长基因组（near full-length genome，NFLG）遗传特征。方法对2017—2020年北京新诊断或初始抗病毒治疗病例进行HIV-1基因型耐药监测，发现5例疑似感染CRF103_01B毒株。通过逆转录、近末端稀释法，分两段巢式PCR扩增HIV-1 NFLG。获得的序列与分型参考序列进行基因比对，使用MEGA11软件构建邻接法（neighbor-joining，NJ）系统进化树。用SimPlot 3.5软件分析确定基因重组断点，绘制基因组结构图。基于亲本毒株同源NFLG序列比对，挑选较长的重组片段构建NJ进化树，判断可能的亲本毒株来源。用斯坦福大学HIV耐药数据库解析基因型耐药特征。结果共获得5条CRF103_01B NFLG序列，其中4例经男男性行为（men who have sex with men，MSM）感染，1例为女性。与从河北检出的4条CRF103_01B NFLG序列合并分析其重组特征：在CRF01_AE骨架上，gag、pol和nef-3'-LTR基因片段被B亚型重组替换[HXB2 nt 1111±19 - 1539±16，2531 - 4478±16（片段Ⅴ），9008±23 - 9615]。亲本来源分析显示，CRF103_01B的片段Ⅳ与Ⅴ分别与北京B亚型（BJMP3294B）和g5簇CRF01_AE序列（JX112804）聚集成大单系进化簇（bootstrap值分别为97%和100%）。9个CRF103_01B病例均携带非核苷类逆转录酶抑制剂类V106I突变。结论CRF103_01B毒株最可能起源于北京MSM人群，并在北京和河北等地的MSM人群中低水平持续流行，并经异性性途径向一般人群播散。需加强该毒株分子流行病学和耐药监测，关注疾病进展。

简介：目的建立正常（CAG重复次数为19次）和异常（CAG重复次数为82和66次）atrophin-1[齿状核红核苍白球路易体萎缩（DRPLA）致病基因]全长基因真核表达体系，通过观察细胞形态及蛋白质表达水平和分布情况，比较稳定转染和瞬时转染两种细胞表达体系，为进一步研究建立良好的细胞模型。方法基于已构建的GFP-atrophin-1．019／Flp—InTREx293和GFP—atrophin-1-Q82／Flp—InTREx293两种稳定转染细胞株，利用四环素调控系统Tet—on诱导表达。正置荧光显微镜观察正常与异常atrophin-1融合蛋白在细胞中的表达定位，电子显微镜观察细胞超微结构的改变；脂质体介导法将重组真核表达质粒GFP—atrophin-1-Q19和GFP—atrophin-1-Q66瞬时转染293T和SH—SY5Y细胞，HE染色、倒置荧光显微镜和电子显微镜分别观察细胞形态结构、蛋白质表达定位和细胞超微结构，Westernblotting检测atrophin-1融合蛋白表达水平。结果在稳定转染体系中，绿色荧光信号大多位于细胞核内，异常蛋白质呈不均匀分布且有少数聚集现象；电子显微镜观察异常细胞胞核结构欠完整，核膜皱缩，核内结构紊乱。在瞬时转染293T细胞体系中，HE染色可见异常细胞核内形成粉紫色嗜酸性小体；大量atrophin-1融合蛋白在核内呈点状聚集现象；电子显微镜观察异常细胞核膜皱缩严重，核内大量电子致密物沉积且核仁消失；Westernblotting检测均表达atrophin-1融合蛋白。在转染的SH-SY5Y细胞体系中，蛋白质表达定位及Westernbloning检测结果与转染293T细胞基本一致。结论包含异常扩增多聚谷氨酰胺链的atrophin-1融合蛋白在真核表达体系中可产生明显的核内聚集现象，并引起细胞形态改变，此为研究DRPLA核内包涵体的形成及其在发病中的作用，以及进一步的干预治疗奠定了理论基础。

简介：利用PCR技术扩增HCVns3基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后与原核表达质粒pProEX-HTb连接,转化感受态细胞E.coliDH5α,酶切鉴定得阳性重组质粒pProEX-HTb-ns3并测序;pProEX-HTb-ns3转化宿主细胞获得工程菌,用IPTG诱导,获得NS3蛋白的高效表达,薄层扫描显示其占菌体总蛋白的35%;目的蛋白在变性条件下经Ni2+-NTA凝胶亲和层析纯化,透析并浓缩后用丙型肝炎患者阳性血清做为一抗行Western-Blot证实特异性和抗原性.结果成功表明,诱导表达产物主要以包涵体形式存在;6His-NTA纯化后获得目的蛋白,Western-blot结果显示纯化蛋白具有良好的抗原性.HCVNS3蛋白的高效表达及纯化,为利用NS3蛋白作为诊断抗原及制备单克隆抗体奠定了基础.

简介：

简介：目的对临床疑似雄激素不敏症患者进行AR基因全长测序连锁分析位点突变。方法提取雄激素不敏感（AIS）疑似患者外周血DNA，做染色体核型分析，了解AR基因各外显子缺失或重复突变情况，进行基因全长测序连锁分析位点突变。A组外生殖器异常表型，表现为尿道下裂并阴茎体发育不良，B组无尿道下裂但为小阴茎。结果A组12例患者中发现3例AR基因突变。第1例发生新的c．D841CGT〉AGT（精氨酸〉丝氨酸）突变，第2例发生c．D172和c．D173插入了TGC三个碱基。第3例存在c．D946T〉C，c.D316络氨酸〉组氨酸突变。3例均确诊为雄激素不敏感，2例为完全型，1例部分型。B组未发现AR基因突变。结论AR基因全长测序可从分子水平初步阐明雄激素不敏感症的病因，指导临床诊治。

简介：启动子是调控外源基因在植物体内表达的“开关”。随着植物转基因技术的广泛应用，无论是基础研究还是应用研究，人们希望能够充分利用启动子来准确控制外源基因在植物体内的表达，使目的基因的“开”和“关”、表达的“多”和“少”、在“何地”和“何时”表达等。能够听从人的指挥，以实现植物育种的分子设计。因此，快速分离和鉴定植物体内各种特异启动子已经成为植物基因工程研究的热点和难点。本文在互补末端连接反向PCR（CELI—PCR）技术基础上建立起…种快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列的新方法。该方法利用CELI—PCR进行染色体连续步移，获取足够长的目的基因及其上游基因组DNA序列，再根据转录起始位点是目的基因转录本和启动子的分界点，其下游转录本中的外显于可通过RT-PCR扩增，而上游启动子序列则不能被RT-PCR扩增这一特点，借助RT-PCR进行cDNA连续步移，直到获得全长cDNA，确定启动子基因5’非翻译区的位置，进而精确定位转录起始位点。从而获取目的基因准确的启动子序列和全长cDNA序列。因此，建立在CELI，PCR基础上的RITIS技术，可绕过繁琐的构建cDNA库和5＇-RACE等方法快速分离目的基因全长cDNA和启动子序列。

简介：摘要锚杆是地下工程中常用的支护材料，但是目前而言能够精确监测锚杆工况的装置并不多，本论文探讨一种全长锚固锚杆的工况监测装置。该装置通过测定锚杆杆体应力状态，根据mises准则，准确判定锚杆工况。

简介：一、全面推进运输安全的法制化建设。（一）增强法制观念，贯彻执行《安全生产法》实践证明：铁路安全工作走向法制化管理轨道，是实现安全长治久安的根本途径。实现法制化管理，对于落实安全管理责权、规范安全管理行为、强化安全监督工作，具有决定性的作用。我们要以实施《安全生产法》为契机，大力推进铁路安全法制化建设，做到依法生产经营，依法规范安全管理，依法履行安全监督职能，教育广大干部职工依法维护自己在安全生产方面的权利，履行应尽的义务。

简介：摘要目的对2016—2019年北京市GII.2[P16]诺如病毒全长基因组进行系统进化分析。方法收集2016—2019年北京市GII.2[P16]诺如病毒毒株，采用一步法RT-PCR对基因组全长进行分段扩增，应用BioEdit软件分析核苷酸相似性和氨基酸变异情况，采用BEAST软件分别构建衣壳蛋白（major capsid protein，VP1）区和RNA聚合酶（RNA-dependent RNA polymerase，RdRp）区全长序列的贝叶斯进化树，结合流行病学资料对毒株进化特征进行分析。结果测得44个毒株的全基因组序列，其VP1和RdRp基因分型一致。进化分析显示北京市2017年5月以后毒株形成新亚群并分为两个分支，分别以2017—2018年和2018—2019年毒株为主。该亚群毒株在VP1区均存在Val256Ile点突变，但RdRp区没有发现氨基酸变异位点。流行病学数据表明，北京市GII.2[P16]型诺如病毒从2016年10月输入，2017年3月至6月为暴发高峰，2017年7月以后暴发数量明显降低,但2018年底暴发又有所增加。结论北京市GII.2[P16]诺如病毒新变异株2017年5月之后基因特征有所改变，暴发强度降低，但仍具有传播风险。

简介：目的通过实验探索一期再造全长指的手术设计和方法.方法在6只食蟹猴上,在掌指关节处切除示指,应用带足背皮瓣和跖骨的第2足趾复合移植一期再造全长示指.结果再造12个全长指术后全部成活,后因感染仅4个再造指存活,随访12个月,存活再造指恢复大部分功能及较好的外观.结论利用带足背皮瓣和跖骨的第2足趾复合移植再造全长示指的方法可行,但需设法提高存活率.

简介：随着部党组提速战略的实施,确保提速安全将是一项长期艰巨的任务,必须着眼长远,探索一套规律性强、能够贯穿提速全过程、确保提速持续安全的强有力的长效机制.一、提速调图工作渐趋复杂,迫切需要建立一套行之有效的安全长效机制铁路每一次大提速都面临着许多新情况、新变化、新问题,特别是第五次大面积提速调图与前四次相比,其复杂程度远远高于以往,特别是在运输安全方面所面临的挑战,比以往任何一次都多:一

简介：摘要:本文主要研究目的为促使脊柱全长拼接图像的质量符合临床诊断需求；研究方法为选取150名患者进行全卧位全长复查，采用X 线摄影（DR）全脊柱摄影拼接技术，借助飞利浦数字化成像设备及飞利浦数字化

简介：

简介：5月6日，美国华尔街股市戏剧性暴跌，主流意见认为：其系统缺陷是主要原因。事件再次显示：信息技术风险不可忽视。安全的IT是业务创新的基础，而我国金融机构重大核心系统大多采用的是国外设备，潜在风险性大。日前，工信部部长李毅中在北京举行的软博会上透露，

简介：目前国内运行十年以上的预应力锚索绝大多数采用的是全长粘结工艺。使用这一工艺的锚固工程长期运行效果如何，会不会成为重大工程的隐患？本文采用归纳分析国内外锚固工程失效案例和漫湾水电站服役20年锚索现场开挖试验两种手段，从防止锚索失效、阻止钢绞线锈蚀和岩土锚固效果等三个方面，对全长粘结预应力锚索长期运行效果问题进行了初步探讨。最终得到如下结论：①全长粘结工艺可以提高预应力锚索的长期运行安全性能。锚索损伤失效存在“从局部开始进而迅速损伤演变导致整体失效”的发展规律。全长粘结工艺能够有效的截断“一处断，整根完”的失效链条，从而，提高预应力锚索的长期运行安全性能。②水泥砂浆可以起到很好的防锈效果。研究表明：全长粘结工艺预应力锚索运行若干年后，有砂浆握裹部位，仍然基本无锈蚀；无砂浆或砂浆握裹不良部位，则有坑蚀发生。③全长粘结工艺可以联合孔壁围岩共同作用，从而达到较好的岩土锚固效果。

简介：今年以来，我局针对干部作风建设中存在的问题，建立健全作风整顿建设长效机制，努力构建学习、服务、创新、廉洁、和谐的新型审计机关。受到省审计厅领导同志的肯定。