简介:摘要目的比较磁珠浓缩法与酶联免疫法(ELISA)检测HBsAg灵敏度和阳性检出率,选用较好的方法用于低浓HBsAg的测定。方法ELISA检测HBsAg为强阳性的血清标本40份,混合为HBsAg强阳性混合血清,用化学发光法检测HBsAg全阴性血清稀释成46例浓度不同的HBsAg阳性血清,然后分别用磁珠浓缩法、酶联免疫法和化学发光法检测。结果磁珠浓缩法检测46份标本阳性例数42例,最低检出浓度0.1IU/mL,ELISA检出阳性标本33例,最低检出浓度0.5IU/mL,磁珠浓缩法灵敏度和检出率明显高于ELISA(P<0.01)。结论磁珠浓缩法可明显提高ELISA检测HBsAg的灵敏度和阳性检出率,具有一定的研究意义。
简介:目的:探索应用免疫磁珠法富集母体外周血DNA并预测其胎儿RHD血型。方法:采集96例来自武汉大学中南医院产前诊断确诊为RHD阴性孕妇外周血,使用免疫磁珠法和血液DNA提取试剂盒(QIAgeneDNA法)抽提母体外周血DNA用以提取胎儿DNA。通过测定母体血浆中的SRY和STR来证实是否获得胎儿DNA,同时使用荧光定量PCR(RQ-PCR)扩增胎儿RHD基因外显子7,预测胎儿RHD血型。结果:通过免疫磁珠法,胎儿DNA的总提取量提高了1.8倍。配对四格表2检验结果显示免疫磁珠法在准确度方面与QIAgeneDNA法相较,妊娠早期(≤14周)2种方法差异有统计学意义(P〈0.05),而妊娠中晚期(〉14周)2种方法差异无统计学意义。另外,使用免疫磁珠法提取DNA预测胎儿RHD血型时,有86例结果与胎儿RHD血清学方法鉴定一致,使胎儿RHD血型预测的准确率高达89.6%。结论:使用免疫磁珠法提取胎儿DNA不仅能够改善胎儿DNA的总提取量,同时还可以提高妊娠早期胎儿RHD血型预测的准确率,为RHD血型不合导致的新生儿溶血病的早期诊断和治疗提供更好的试验基础。
简介:目的该实验比较了CD133免疫磁珠法及羟乙基淀粉法分离脐血单个核细胞(MNCs)的特点,探讨一种相对较好的MNCs分离方法。方法取2007年10月至2008年3月新疆医科大学第一附属医院足月妊娠健康产妇的脐血15份,每份脐血分别用羟乙基淀粉沉淀法、CD133免疫磁珠法处理。分离后计数并在倒置显微镜下观察原代细胞的生长情况及其形态特征,原代第30天通过流式细胞仪检测CD34阳性率。结果羟乙基淀粉沉淀法、CD133免疫磁珠组得到的MNCs数量分别为(15.23±4.30)×10^6/mL,(0.066±0.027)×10^6/mL(P〈0.05)。羟乙基淀粉沉淀法所得细胞大多悬浮生长,传代后生长缓慢;CD133免疫磁珠法的细胞生长状态良好,其CD34阳性率分别为10.1%、0.5%。结论羟乙基淀粉沉淀法是一种高效的脐血细胞分离方法,但细胞生长状态欠佳;而CD133免疫磁珠法所获细胞纯度较高,可根据不同要求选用相应分离法。
简介:目的建立免疫磁珠捕获精子的方法,比较4种不同抗体制备的免疫磁珠捕获模拟检材中精子的效果,探索其分离混合斑的可行性以及优缺点。方法分别用4种抗体制备免疫磁珠,对不同比例混合细胞悬液(上皮细胞与精子)中的精子和放置不同时间的纯精斑进行提取,将磁珠吸附到的细胞进行DNA-STR分型,对比4种磁珠的差异。结果4种磁珠都能特异性地将精子分离出来,分型结果与男性供者已知分型一致。经X2检验,当上皮细胞与精子的比例大于100:1或小于10:1时,P〉0.05,捕获结果没有明显差异;当其比例在10:1时,P〈0.05,抗PH20抗体磁珠的灵敏度高于其余三种抗体。捕获放置1天和15天精斑的成功率结果差别P〉0.05,没有明显差异。捕获放置30天的精斑结果差别P〈0.05,抗JLP抗体磁珠有明显优势,而抗ADAM2抗体磁珠效果最差。结论4种不同抗体制备的免疫磁珠在捕获精子的灵敏度上有差异,可以根据需要选择抗体制备免疫磁珠,有望实现对不同混合斑的分离。
简介:目的建立泰泽氏病原体(Ty)纯化方法,获得纯的菌体供抗原研究,为ELISA诊断抗原的制备提供依据;并尝试建立Ty隐性感染血清学抗原检查方法。方法选择特异性抗体包被磁珠,从感染大鼠肝脏中富集和纯化Ty;用SDS-PAGE和Westernblot技术考察纯化Ty的蛋白和抗原图谱;同时用免疫磁珠分离技术(IMS)直接检查隐性感染大鼠肠道上皮细胞内的Ty。结果用辛酸-硫酸铵纯化的Ty单克隆抗体M5以0.5μg/10^7beads以上浓度包被抗IgG抗体预结合的磁珠4h,可最大效率地富集Ty;分离反应进行1h,敏感性达到1矿菌体/mL;吖啶黄染色镜检法可以直接、快速地观察到结合于磁珠上的细菌;抗原分析表明,IMS较好地去除了肝组织和真核细胞成分,纯化的TvRJ株具有3个免疫优势的抗原成分,相对分子质量(Mr)分别为160×10^3、116×10^3、55×10^3;此外,IMS法可直接从隐性感染大鼠盲肠上皮细胞中检测到少量寄生的Ty。结论用IMS技术可有效地富集和纯化Ty,并可以作为Ty隐性感染血清学抗原检查的候选方法。
简介:目的研究DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪对接触DNA提取的应用价值。方法151份案件接触DNA检材95℃裂解后,采用DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪提取DNA,然后进行DNA定量和STR分型检测,统计各种类型的接触DNA含量I、PCCT值和STR分型成功率。结果151份案件接触DNA检材中,除果核平均DNA获得量为9.51ng以外,其它接触检材的平均DNA获得量均大于10ng,烟蒂检验成功率最高为93%,果核检验成功率较低,为60%。所有DNA样品的IPCCT值均在27左右,纯度高。结论大部分接触DNA检材采用DNAIQ磁珠法结合MaxwellTM16自动仪可提取到足以进行STR分型的DNA。
简介:目的:利用磁珠富集法分离北柴胡微卫星序列,以开发北柴胡微卫星引物,获得有多态性的简单序列重复(SSR)标记。方法:用生物素标记的混合探针(AC)15、(AG)15、(MAB)12:和两端连接已知序列人工接头的北柴胡基因组DNA酶切片段混和后与磁珠杂交,构建微卫星序列富集的小片段插入文库;利用接头引物分别与生物素探针引物Biotin-(Ac)15、Biotin-(AG)15、Biontin-(MAB)。2形成3个组合,用PCR方法对文库进行初步筛选;对可能的阳性克隆子进行测序复筛,选取微卫星侧翼序列足够长的序列设计引物,用荧光标记的基因分型技术以栽培柴胡种质为材料分析其多态性。结果:开发了5对多态性SSR标记,它们在5份柴胡栽培种质中共扩增出30.70个多态性等位基因,平均每条引物可以扩增出6.14个多态性等位基因;观察等位基因数最多13个,最少3个;有效等位基因数最多11.4个,最少1.6个。同时分析了4对EST-SSR引物,比较了2种SSR标记扩增结果。结论:磁珠富集法是开发柴胡多态性SSR标记的有效方法。
简介:目的:建立并改良磁珠提取基因DNA的方法,以应用于HLA常规测序分型。方法:使用磁珠法自动提取系统从全血中提取基因组DNA,利用DNA定量仪测定DNA浓度与纯度,利用测序仪对PCR扩增产物进行测序及相关的分析软件进行HLA分型结果分析。比较改良前后DNA浓度与纯度、HLA分型结果成功率、信噪比及测序胶图的反应格局。结果:改良后96份DNA浓度的均一性、纯度均优于改良前;32份HLA分型结果中HLA-A、B位点成功率改良后高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32人份HLA-B第二外显子信噪比(N/S)合格率均高于改良前,差异有统计学意义(P〈0.01);改良后32份分型胶图反应格局均优于改良前。结论:改良磁珠提取DNA法能稳定、可靠地应用于HLA测序分型,具有快速、高通量化的特点和广泛的应用前景。
简介:摘要目的探讨免疫磁珠负性富集结合免疫荧光抗体技术检测卵巢癌患者外周血CTCsDE的临床意义。方法健康志愿者6例、良性卵巢病变4例纳入常规组,卵巢癌患者32例纳入研究组。开展卵巢癌SKOV-3细胞体外培养,以一定配比加入到常规组外周血中,通过免疫磁珠负性富集、免疫荧光抗体技术检测循环肿瘤细胞。结果CTCs检测回收率介于65%-80%,r2=0.998,Y=0.782X-1.408。常规组CTCs阳性检出率为0,研究组CTCs阳性检出率为53.13%,有统计学意义(p<0.05)。卵巢癌远处转移与CTCs阳性率呈正相关。结论对卵巢癌患者外周血CTCs进行免疫磁珠负性富集结合免疫荧光抗体技术检测的价值较高。
简介:【摘要】目的:分析全自动磁微粒发光免疫分析法(CMIA)检测梅毒抗体结果。方法:以检验科梅毒抗体检测标本1000份为观察对象,CMIA进行标本筛查,观察梅毒抗体阳性者年龄与性别等分布情况,并观察不同定量区间检测结果。结果:梅毒抗体检测结果在性别分布方面以女性居高,在年龄分布方面>60岁较高;试剂生产厂家提供灰区范围0.7-4.0间,此区间内梅毒抗体与TPPA符合率为90.00%。结论:CMIA检测梅毒抗体操作简单,且精准度较高,对于阳性患者给予TPPA复检可进一步提升准确性。
简介:目的结合免疫磁珠分离技术和流式细胞术两种方法,对大鼠外周血突变型红细胞进行富集和检测,优化大鼠外周血Pig-a基因突变试验方法。方法用20、40和80mg/(kg·bw)剂量的N-乙基-N-亚硝基脲(N-ethyl-N-nitrosourea,ENU)连续3d给予SD大鼠,在染毒前、染毒后第7、14和28天分别采集大鼠外周血,经免疫磁性分离柱富集RETCD59-和RBCCD59-,用流式细胞术分别对免疫磁珠分离柱前和柱后的外周血红细胞进行计数。结果与对照组相比,ENU各剂量组的RETCD59-和RBCCD59-发生率均显著升高(P<0.05);采用免疫磁珠分离技术后,可以在3min内完成一个样品的Pig-a基因突变检测,分析的RETCD59-或RBCCD59-细胞数量分别最高可达2×104个或9×104个。结论本研究联合运用免疫磁珠分离术和流式细胞术,建立并优化了大鼠体内Pig-a基因突变试验方法,实现了高通量检测,提高了试验的准确性和效率。
简介:摘要目的探讨利用免疫磁珠富集技术联合巢式RT-PCR。方法检测非小细胞肺癌患者(NSCLC)手术前后外周血微转移的预后价值。方法应用免疫磁珠联合巢式LUNX-mRNART-PCR检测80例NSCLC患者手术前后外周血微转移,研究其与临床和病理特征的相关性和预后价值。结果手术前和手术后,LUNX表达阳性率分别为41例(51.3%)和28例(35.0%);手术前LUNX表达阳性率与病理分期有关。手术后LUNX表达阳性率与病理分期、病理类型、体重减轻和KPS评分有关。手术前LUNX表达阳性和阴性患者的4年生存率分别为26.8%和35.9%;手术后LUNX表达阳性和阴性患者的4年生存率分别为17.8%和38.5%;多因素分析显示,手术后LUNX表达阳性是一独立不良预后因素。结论免疫磁珠富集技术联合巢式RT-PCR方法是检测NSCLC患者外周血微转移的敏感方法,手术后检测微转移有预后价值;微转移阴性患者比阳性患者预后好