简介:摘要:企业工会是拉近党与职工群众的重要组织,是将企业和职工群众紧密相连的组织,是企业的重要组成部分。随着我国社会主义民主政治建设步伐加快,国有企业民主政治建设也与时俱进有了很大的发展,企业民主管理内容更加丰富、领域更加广泛、形式更加多样,工会组织始终坚持民主管理推动现代企业发展。深入推进企业民主管理是建立完善企业制度、构建和谐劳动关系、维护职工合法权益的必要途径和重要手段,工会组织要时刻站在职工的立场思考问题、分析问题、解决问题,建立科学的民主管理工作模式,进一步提升工会组织民主管理工作的水平,增强企业与职工的有效沟通。本文浅析在新形势下企业工会组织民主管理工作存在的问题,针对工会组织民主管理工作提出创新性对策,实现职工利益与企业利益双赢的局面。
简介:摘要目的探讨miRNA-34a(miR-34a)靶向高迁移率族蛋白B1(HMGB1)逆转骨肉瘤细胞顺铂耐药的相关机制。方法采用剂量递增间歇作用的方法构建MG-63顺铂耐药细胞株(MG-63/DDP)。使用不同浓度顺铂(0、1、5、10、20、30 μg/ml)处理MG-63/DDP细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率。将MG-63/DDP细胞分别转染miR-34a过表达载体(miR-34a过表达载体组)及miR-34a空表达载体(miR-34a-NC组),采用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测miR-34a的相对表达量;使用不同浓度顺铂(0、1、5、10、20、30 μg/ml)处理细胞,采用CCK-8法检测细胞存活率,流式细胞术检测细胞凋亡情况;采用双荧光素酶报告基因实验验证miR-34a是否调控HMGB1的表达,蛋白质印迹法检测转染后细胞的HMGB1蛋白表达量。将MG-63/DDP细胞分别转染HMGB1基因沉默载体(si-HMGB1组)及其阴性对照载体(si-NC组),采用蛋白质印迹法检测HMGB1蛋白表达量;CCK-8法检测细胞存活率。结果MG-63/DDP细胞株构建成功。不同浓度顺铂作用后,MG-63/DDP细胞存活率均高于MG-63细胞(均P<0.01)。MG-63/DDP细胞和MG-63细胞对顺铂的半数抑制浓度(IC50)分别为25.80 μg/ml和0.47 μg/ml。MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量低于MG-63细胞(0.46±0.04比1.02±0.05,t=15.14,P<0.01);与miR-34a-NC组相比,miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞中miR-34a相对表达量增加(1.67±0.09比1.00±0.02,t=-12.58,P<0.01)。miR-34a过表达载体组、miR-34a-NC组细胞存活率随着顺铂浓度增加而降低,5~30 μg/ml顺铂作用后,miR-34a过表达载体组细胞存活率均低于miR-34a-NC组(均P<0.01)。20 μg/ml顺铂处理24 h后,miR-34a-NC组和miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞凋亡率分别为(25.1±1.7)%、(42.3±2.3)%,miR-34a过表达载体组MG-63/DDP细胞具有更高的凋亡率(P<0.01)。双荧光素酶报告基因实验结果显示,与miR-34a-NC组相比,miR-34a过表达载体组能够抑制PGL3-野生型-HMGB1荧光素酶活性,差异具有统计学意义(t=6.37,P<0.01),而miR-34a过表达载体组对PGL3-突变型-HMGB1荧光素酶活性无明显抑制效果(t=0.35,P=0.74)。miR-34a过表达载体组HMGB1蛋白相对表达量低于miR-34a-NC组(0.43±0.02比1.00±0.14,t=6.98,P<0.01)。与si-NC组相比,si-HMGB1组HMGB1蛋白相对表达量及IC50均降低(均P<0.05)。结论miR-34a过表达能够增强骨肉瘤细胞MG-63/DDP对顺铂的化学敏感性,其作用机制可能与抑制HMGB1的表达有关。
简介:摘要目的探讨miRNA-1-3p(miR-1-3p)对骨肉瘤细胞肌细胞增强因子2A(MEF2A)表达及生物学功能的影响。方法收集2019年1月至2020年1月山西省肿瘤医院临床确诊的20例骨肉瘤患者的肿瘤组织及癌旁正常组织,使用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测样本中miR-1-3p表达水平。采用qRT-PCR检测骨肉瘤细胞株U2-OS、SAOS-2、MG63、SW1353及人正常成骨细胞株hFOB1.19中miR-1-3p表达水平,选择miR-1-3p表达水平最低的细胞株进行后续实验。构建过表达miR-1-3p载体(miR-1-3p mimcs),转染miR-1-3p mimcs的细胞为miR-1-3p过表达组,转染空载体(miR-1-3p nc)的细胞为对照组;使用CCK-8法检测细胞增殖活性,流式细胞术检测细胞凋亡和细胞周期变化。采用miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因,并通过双荧光素酶报告基因实验进行验证;蛋白质印迹法检测各组细胞MEF2A蛋白的表达。结果与癌旁组织相比,骨肉瘤组织中miR-1-3p表达下调(0.31±0.14比0.62±0.21),差异有统计学意义(t=5.31,P<0.01)。miR-1-3p在骨肉瘤U2-OS细胞中表达最低;与对照组相比,miR-1-3p过表达组细胞U2-OS细胞增殖活性受抑制(48 h吸光度值0.56±0.01比0.77±0.03,t=2.77,P<0.01;72 h吸光度值0.87±0.02比1.40±0.03,t=2.93,P<0.01),细胞周期G1至S期阻滞增加[G1期(38.24±0.55)%比(32.11±0.80)%,t=9.27,P=0.01;S期(61.24±0.90)%比(67.78±0.83)%,t=7.52,P=0.02],细胞早期凋亡率升高[(11.20±0.12)%比(1.50±0.12)%,t=2.91,P<0.05]。miRwalk网站工具预测miR-1-3p靶基因为MEF2A。双荧光素酶报告基因检测结果显示,miR-1-3p和MEF2A 3'UTR靶向结合,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞荧光素酶活性低于对照组(海肾荧光素酶与萤火虫荧光素酶活性比值0.53±0.06比1.00±0.04,t=4.04,P<0.05);蛋白质印迹法结果显示,miR-1-3p过表达组U2-OS细胞MEF2A蛋白表达水平较对照组低(蛋白相对表达量0.41±0.14比0.77±0.12,t=3.93,P<0.05)。结论miR-1-3p低表达可能与骨肉瘤细胞增殖、凋亡和周期改变相关。miR-1-3p可负向调控MEF2A蛋白表达并调控骨肉瘤的发生、发展。